美羅華和TSA聯(lián)合誘導(dǎo)B淋巴瘤細(xì)胞系凋亡機(jī)制及淋巴瘤相關(guān)基因突變的研究.pdf

1、非霍奇金氏淋巴瘤是一種起源于淋巴組織的異質(zhì)性惡性腫瘤，NHL的標(biāo)準(zhǔn)治療包括放療和化療，有效率高，但復(fù)發(fā)率也高。再次治療緩解率低，緩解持續(xù)時間短，且毒副反應(yīng)大，患者不能耐受，尤其是老年或合并其它疾患患者。 美羅華是一種人一鼠嵌合型抗CD20的IgGl單抗，由人IgGl恒定區(qū)與鼠單抗重鏈和輕鏈可變區(qū)構(gòu)成。盡管美羅華單藥治療NHL有效且耐受性好，但只有一小部分病人取得完全緩解，且其中大部分病人最終復(fù)發(fā)。曲古抑菌素A(trichosta

2、tin A，TSA)最初被當(dāng)作抗真菌藥物使用，是組蛋白去乙?；?histone deacetylase，HDAC)抑制劑。HDAC抑制劑可以通過抑制組蛋白去乙?；?HDACs)，阻斷由于HDAC募集功能紊亂而導(dǎo)致的基因表達(dá)受抑，從而達(dá)到抗腫瘤效應(yīng)。 本研究選用對美羅華治療敏感的人類伴t(14；18)易位的濾泡淋巴瘤細(xì)胞系SU—DHL-4及對美羅華治療不敏感的人類Burkitt淋巴瘤細(xì)胞系Daudi，在體外研究美羅華與TSA聯(lián)

3、合應(yīng)用誘導(dǎo)凋亡的效果及其可能的作用機(jī)制。 等效應(yīng)線圖法分析表明美羅華與TSA聯(lián)合應(yīng)用SU-DHL-4及Daudi細(xì)胞均有協(xié)同作用。在兩個細(xì)胞系，美羅華與TSA單用或合用可下調(diào)Bcl-xL蛋白，不下調(diào)BCL-2蛋白的表達(dá)。在Daudi細(xì)胞美羅華下調(diào)Bcl-xL，但其下調(diào)的水平還不足以誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生明顯凋亡，TSA單用或TSA與美羅華合用后Bcl-xL明顯下調(diào)，細(xì)胞隨之發(fā)生凋亡?？梢哉J(rèn)為，Bcl-xL表達(dá)水平與淋巴瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡的閾值

4、密切相關(guān)。在非霍奇金氏淋巴瘤的治療策略中，無論是高表達(dá)BCL-2的濾泡淋巴瘤或是其它類型的非霍奇金氏淋巴瘤，因主要以Bcl-xL為靶點(diǎn)，而非BCL-2。 在NF-κB組成型激活的Daudi細(xì)胞，美羅華與TSA單用或合用后可下調(diào)P65蛋白的表達(dá)，從而可能抑制NF-κB信號途徑。 在NF-κB非組成型激活的SU-DHL-4細(xì)胞，我們發(fā)現(xiàn)TSA單用及合用均可使IκBα降解，這可能導(dǎo)致NF-κB的激活，且IκBα反饋性調(diào)節(jié)NF-

5、κB能力降低，從而NF-κB信號通路可能持續(xù)激活。 TSA在NF-κB組成型激活的Daudi細(xì)胞及非組成型激活的SU—DHL-4細(xì)胞均可下調(diào)Bcl-xL，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。 結(jié)果表明，美羅華與組蛋白去乙?；敢种苿┖嫌每赡艹蔀锽細(xì)胞非霍奇金氏淋巴瘤的又一種有效治療方法。 另外，還采用PCR直接測序的方法對一些淋巴瘤相關(guān)基因突變進(jìn)行了研究。在71例淋巴瘤檢測中發(fā)現(xiàn)1例DLBCL病人PRDMl基因的第六外顯子的第44位

6、核苷酸A>T變異是導(dǎo)致氨基酸改變的錯義突變，使野生型PRDMl蛋白第678位氨基酸由谷氨酰氨轉(zhuǎn)變?yōu)榱涟彼?，改變了PRDMl蛋白的第二個鋅指結(jié)構(gòu)，有可能改變PRDMl蛋白的功能參與淋巴瘤的發(fā)生。 在2例DLBCL和1例MCL病人發(fā)現(xiàn)PRDMl基因5’調(diào)控區(qū)一616位G>C突變，可能改變了AML1基因?qū)RDMl基因的調(diào)控結(jié)合位點(diǎn)，導(dǎo)致PRDMl基因的轉(zhuǎn)錄異常及淋巴瘤的發(fā)生。 在EBV陽性的NAMALWA細(xì)胞系中，我們發(fā)現(xiàn)P