馬兜鈴酸誘導(dǎo)小鼠淋巴瘤細(xì)胞突變機(jī)制的研究.pdf

1、馬兜鈴酸存在于65種以上的馬兜鈴科植物中，其中有許多曾用于傳統(tǒng)中藥、食品補(bǔ)充劑或草藥療法減肥。近年來(lái)，人們發(fā)現(xiàn)馬兜鈴酸是一種對(duì)人和動(dòng)物都有致突變性的強(qiáng)致癌劑。在之前的研究中，我們發(fā)現(xiàn)馬兜鈴酸是一種強(qiáng)致突變劑，對(duì)小鼠淋巴瘤細(xì)胞有顯著的細(xì)胞毒性和致突變作用。本研究中我們進(jìn)一步闡明馬兜鈴酸(Aristolochic Acid, AA)的致突變分子機(jī)制，本試驗(yàn)采用“小鼠淋巴瘤細(xì)胞L5178Y/TK+/-致突變檢測(cè)方法”（L5178Y/TK+/-

2、 Mouse Lymphoma Mutation Assay，MLA）來(lái)獲得胸苷激酶基因（tk）突變克隆。為了檢測(cè)含功能性tk基因的11號(hào)染色體（11b）上DNA斷裂情況，我們挑取對(duì)照組和100μg/ml AA處理小鼠淋巴瘤L5178Y tk+/--3.7.2-細(xì)胞得到的tk基因突變克隆，提取DNA，用基于PCR的雜合性缺失（Loss of heterozygosity，LOH）的分析方法考察11號(hào)染色體上分布的tk位點(diǎn)和其他三個(gè)微衛(wèi)星

3、位點(diǎn)（D11Mit42, D11Mit29, D11Mit74）的雜合性缺失情況。從檢測(cè)結(jié)果來(lái)看100μg/ml AA誘導(dǎo)的突變體中功能性tk基因缺失率為99％，其中所有的小克隆都失去了功能性tk基因，而大克隆的LOH發(fā)生率為96.6％。進(jìn)一步分析了11號(hào)染色體上的分布的3個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)（D11Mit42, D11Mit29, D11Mit74）的雜合性缺失狀況如下：6cm長(zhǎng)度的DNA斷裂頻率為76％，38cm長(zhǎng)度DNA即超過(guò)染色體一半長(zhǎng)

4、度的DNA斷裂頻率為34％，整條染色體的缺失率為16％。這些都說(shuō)明馬兜鈴酸是一種強(qiáng)染色體斷裂劑，能導(dǎo)致大范圍的DNA改變。另外我們發(fā)現(xiàn)大克隆在三個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)（D11Mit42, D11Mit29, D11Mit74）上的LOH發(fā)生率分別是：88％，60％，24％；小克隆的分別為：64％，8％，8％，這說(shuō)明在11b染色體上大克隆的染色體斷裂情況比小克隆的嚴(yán)重。這個(gè)結(jié)果與認(rèn)為大片斷DNA損傷主要得到小克隆，點(diǎn)突變主要得到大克隆的假說(shuō)不符。由