TSA協(xié)同MG-132誘導淋巴瘤和骨髓瘤細胞凋亡及其機制的初步探討.pdf

1、目的：觀察組蛋白去乙?；敢种苿㏕SA和蛋白酶體抑制劑MG-132單獨作用和聯(lián)合應用對骨髓瘤及淋巴瘤細胞的增殖、周期以及誘導細胞凋亡的影響,評估TSA和MG-132聯(lián)合應用對腫瘤細胞殺傷的協(xié)同作用以及其中IRF4、c-Myc的表達變化。
　　 材料和方法采用組蛋白去乙酰化酶抑制劑TSA和蛋白酶體抑制劑MG-132作用淋巴瘤細胞系EL4、WEHI-231和多發(fā)性骨髓瘤細胞系J558、SP2/0、P3NSI。分別應用臺盼蘭法和Ann

2、exinV/PI雙、單染流式細胞儀觀察兩種藥物以不同濃度單獨和聯(lián)合作用后細胞增殖、周期和凋亡的變化。Bliss法計算TSA/MG-132對各細胞株的IC50值,基于Isobolographic method法的Calcuysn軟件計算協(xié)同作用指數(shù)CI(Combinationindices,CI),評價藥物協(xié)同作用。Westernblot檢測不同濃度藥物單獨和聯(lián)合作用后細胞內(nèi)周期和凋亡相關蛋白表達的變化,包括細胞內(nèi)周期相關蛋白Cyclin

3、D1、p21和凋亡相關蛋白Bcl-2、Bax、caspase3。同時,觀察了IRF4和c-Myc蛋白表達水平在藥物作用的淋巴瘤和骨髓瘤細胞中的差異。
　　 結果 TSA和MG-132均可在24小時后呈藥物濃度依賴的細胞增殖抑制。對于TSA,各細胞株IC50為3.5-8.0nM,MG-132為2.2-4.4uM。對5株細胞的協(xié)同作用指數(shù)CI值均小于1:P3NSI的CI值為0.004-0.293,J558的CI值為0.068-0.4

4、23,SP2/0D的CI值為0.029-0.319,WEHI的CI值為0.056-0.741,EL4的CI值為0.109-0.346。TSA/MG-132單獨作用各細胞株時,細胞凋亡呈藥物濃度依賴性增高;聯(lián)合藥物作用于細胞株,細胞凋亡率增長,協(xié)同誘導細胞凋亡作用明顯。細胞凋亡相關蛋白caspase-3激活,Bax、Bcl-2表達均減少。各細胞均阻滯于G0-G1期。藥物作用24后,G0/G1期細胞平均約增長一倍:41％增加到75％。統(tǒng)計分

5、析顯示,藥物伍用對細胞周期阻滯沒有協(xié)同作用。CyclinD1表達水平下降,p21水平顯著上升。J558、SP2/0、P3NSI中,IRF4表達能被藥物抑制,聯(lián)合用藥能加強抑制作用;WEHI-231、EL4中,IRF4表達水平明顯低于前3株細胞,與藥物作用沒能顯示明顯的相關性。所有細胞株中,轉(zhuǎn)錄因子c-Myc表達水平隨藥物作用顯示不同程度的下調(diào),聯(lián)合用藥能加強抑制作用。
　　 結論本研究表明,TSA和MG-132單獨作用淋巴瘤細胞

6、株WEHI-231、EL4和骨髓瘤細胞細胞株J558、SP2/0、P3NSI,均能誘導藥物濃度依賴的細胞增殖抑制、周期阻滯和凋亡;聯(lián)合用藥時能發(fā)揮顯著協(xié)同作用,提高細胞增殖抑制率、誘導細胞凋亡率。但對周期阻滯協(xié)同作用不明顯。IRF4在J558、SP2/0、P3NSI中隨TSA/MG-132作用呈相關性下調(diào),c-Myc在5株細胞中均隨TSA/MG-132作用呈相關性下調(diào)。提示,IRF4、c-Myc可能涉及TSA和MG-132協(xié)同誘導腫瘤細