小白菊內酯誘導EB病毒陽性伯基特淋巴瘤細胞凋亡和深菌毒性機制研究.pdf

1、[目的]
　　 EB病毒以潛伏感染形式寄存在EB病毒相關腫瘤細胞中,NF-κB起著關鍵性作用。抑制NF-κB活性能夠誘導朗病毒進入溶菌循環(huán),并對腫瘤細胞產生溶菌毒性。有研究表明,闡明小白菊內酯(parthenolide,PN)具有抑制NF-kB的作用。本課題旨在探討PN對EB病毒陽性伯基特淋巴瘤的抑制作用,以及對腫瘤細胞中EB病毒溶菌循環(huán)的誘導作用和溶菌毒性,并對其機制作初步探討,進一步研究PN以及聯合抗病毒藥物治療EB病毒陽性

2、伯基特淋巴瘤的可行性和臨床應用價值。
　　 [方法]
　　 通過描繪細胞生長曲線、MTT的方法觀察PN對Raji細胞的生長和活性抑制情況;annexin V-PI和DAPI染色觀察PN對細胞的促凋亡作用;流式細胞技術分析PN對Raji細胞周期的影響;Western-blot檢測PN作用后caspase表達;RT-PCR分析不同濃度PN作用后BZLF1、BRLF1基因表達;使用ELISA方法檢測不同濃度PN作用后細胞內NF

3、-kB(p65)活性的變化;western-blot分析PN作用前后胞漿、胞核中NF-κB量的變化;MTT法分析PN與更昔洛韋合用對Raji細胞毒作用。
　　 統(tǒng)計學處理:數據統(tǒng)計分析采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件包進行處理,實驗所得數據以均數士標準差(-x±SD)表示,多組間比較采用One-wayANOVA統(tǒng)計方法分析,p＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。
　　 [結果]
　　 1.PN抑制Raji細胞增殖。MTT

4、結果顯示使用4umol/L、6umol/L、8umol./L、12umol/L PN處理Raji細胞后,其增殖能力顯著抑制,48小時抑制率分別為0.37±0.04、0.4375±0.1、0.59±O.1、0.97±0.02(p＜0.05)(MTT分析)
　　 2.PN誘導Raji細胞凋亡。DAPI染色顯示PN處理組凋亡細胞比例明顯高于對照組,armexin V-PI標記流式細胞儀檢測結果.0 umol/L、4 umol/L、6

5、umol/LPN作用Raji細胞48小時后凋亡細胞數分別為:3％±2％、26％±2％、37％±3％.
　　 (流式細胞術分析)
　　 3.PN導致Raji細胞周期阻滯。流式細胞儀檢測細胞周期顯示PN處理組G0/G1期細胞數增多。(流式細胞術分析)
　　 4.PN誘導Raji細胞凋亡通過線粒體途徑。(Western-blot分析)
　　 5.PN能夠誘導Raji細胞進入溶菌循環(huán)。(RT-PCR法分析)

6、>　　 6.PN抑制NF-κB(p65)活性。Western-blot檢測不同濃度的PN處理細胞后,與空白對照比NF-κB(p65)蛋白表達量在細胞核中明顯減少,并且ELISE結果提示NF-kB(p65)活性明顯被抑制。(Western-blot法分析、ELiSE法分析)
　　 7.PN與更昔洛韋聯合能夠明顯增強其對Raji細胞的毒作用。(MTT分析)
　　 結論:小白菊內酯對朗病毒相關伯基特淋巴瘤細胞具有細胞毒性及溶