小白菊內(nèi)酯誘導(dǎo)EB病毒陽性伯基特淋巴瘤細(xì)胞凋亡和深菌毒性機(jī)制研究.pdf

1、[目的]
　　 EB病毒以潛伏感染形式寄存在EB病毒相關(guān)腫瘤細(xì)胞中,NF-κB起著關(guān)鍵性作用。抑制NF-κB活性能夠誘導(dǎo)朗病毒進(jìn)入溶菌循環(huán),并對腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生溶菌毒性。有研究表明,闡明小白菊內(nèi)酯(parthenolide,PN)具有抑制NF-kB的作用。本課題旨在探討PN對EB病毒陽性伯基特淋巴瘤的抑制作用,以及對腫瘤細(xì)胞中EB病毒溶菌循環(huán)的誘導(dǎo)作用和溶菌毒性,并對其機(jī)制作初步探討,進(jìn)一步研究PN以及聯(lián)合抗病毒藥物治療EB病毒陽性

2、伯基特淋巴瘤的可行性和臨床應(yīng)用價(jià)值。
　　 [方法]
　　 通過描繪細(xì)胞生長曲線、MTT的方法觀察PN對Raji細(xì)胞的生長和活性抑制情況;annexin V-PI和DAPI染色觀察PN對細(xì)胞的促凋亡作用;流式細(xì)胞技術(shù)分析PN對Raji細(xì)胞周期的影響;Western-blot檢測PN作用后caspase表達(dá);RT-PCR分析不同濃度PN作用后BZLF1、BRLF1基因表達(dá);使用ELISA方法檢測不同濃度PN作用后細(xì)胞內(nèi)NF

3、-kB(p65)活性的變化;western-blot分析PN作用前后胞漿、胞核中NF-κB量的變化;MTT法分析PN與更昔洛韋合用對Raji細(xì)胞毒作用。
　　 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行處理,實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差(-x±SD)表示,多組間比較采用One-wayANOVA統(tǒng)計(jì)方法分析,p＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 [結(jié)果]
　　 1.PN抑制Raji細(xì)胞增殖。MTT

4、結(jié)果顯示使用4umol/L、6umol/L、8umol./L、12umol/L PN處理Raji細(xì)胞后,其增殖能力顯著抑制,48小時抑制率分別為0.37±0.04、0.4375±0.1、0.59±O.1、0.97±0.02(p＜0.05)(MTT分析)
　　 2.PN誘導(dǎo)Raji細(xì)胞凋亡。DAPI染色顯示PN處理組凋亡細(xì)胞比例明顯高于對照組,armexin V-PI標(biāo)記流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果.0 umol/L、4 umol/L、6

5、umol/LPN作用Raji細(xì)胞48小時后凋亡細(xì)胞數(shù)分別為:3％±2％、26％±2％、37％±3％.
　　 (流式細(xì)胞術(shù)分析)
　　 3.PN導(dǎo)致Raji細(xì)胞周期阻滯。流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期顯示PN處理組G0/G1期細(xì)胞數(shù)增多。(流式細(xì)胞術(shù)分析)
　　 4.PN誘導(dǎo)Raji細(xì)胞凋亡通過線粒體途徑。(Western-blot分析)
　　 5.PN能夠誘導(dǎo)Raji細(xì)胞進(jìn)入溶菌循環(huán)。(RT-PCR法分析)

6、>　　 6.PN抑制NF-κB(p65)活性。Western-blot檢測不同濃度的PN處理細(xì)胞后,與空白對照比NF-κB(p65)蛋白表達(dá)量在細(xì)胞核中明顯減少,并且ELISE結(jié)果提示NF-kB(p65)活性明顯被抑制。(Western-blot法分析、ELiSE法分析)
　　 7.PN與更昔洛韋聯(lián)合能夠明顯增強(qiáng)其對Raji細(xì)胞的毒作用。(MTT分析)
　　 結(jié)論:小白菊內(nèi)酯對朗病毒相關(guān)伯基特淋巴瘤細(xì)胞具有細(xì)胞毒性及溶