小白菊內(nèi)酯干預(yù)Jurkat細(xì)胞粘附骨髓基質(zhì)細(xì)胞的作用及機(jī)制.pdf

1、目的：通過體外模擬骨髓微環(huán)境，觀察急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)患者骨髓基質(zhì)細(xì)胞(BMSCs)對Jurkat細(xì)胞的粘附作用及小白菊內(nèi)酯(PTL)對此粘附作用的干預(yù)效果，并探討其可能的作用機(jī)制。
　　方法：采集2013年10月-2014年3月于桂林醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院住院經(jīng)FAB分型及MICM分型確診為急性淋巴細(xì)胞白血病并經(jīng)治療后緩解的6例患者髂后上棘骨髓液，體外分離培養(yǎng)BMSCs。Jurkat細(xì)胞復(fù)蘇后傳代培養(yǎng)，取生長狀態(tài)良好的細(xì)胞用于實(shí)

2、驗(yàn)，建立BMSCs與Jurkat細(xì)胞共培養(yǎng)模型。設(shè)置Jurkat細(xì)胞組、BMSCs組、BMSCs+Jurkat細(xì)胞組、BMSCs+Jurkat細(xì)胞+PTL4μ mol/L組、BMSCs+Jurkat細(xì)胞+PTL8μmol/L組、BMSCs+Jurkat細(xì)胞+PTL12μmol/L組、BMSCs+Jurkat細(xì)胞+PTL16μmol/L組。通過MTT法分別檢測加入PTL前、后兩者共培養(yǎng)24h、48h的粘附率，觀察BMSCs對Jurkat細(xì)

3、胞的粘附作用及PTL的干預(yù)效果;通過ELISA法測定PTL干預(yù)前、后兩者共培養(yǎng)上清液中可溶性血管細(xì)胞粘附分子-1（sVCAM-1）的表達(dá);采用RT-PCR法檢測PTL干預(yù)前、后共培養(yǎng)模型中BMSCs VCAM-1mRNA的相對表達(dá)量。
　　結(jié)果：MTT法結(jié)果顯示，藥物作用24h后，對照組和PTL各濃度組(4μmol/L，8μmol/L，12μmol/L，16μmol/L)的粘附率分別為59.64％±4.32％、39.10％±3.8

4、0％、28.52％±4.74％、21.01％±3.55％、13.92％±1.88％,對照組與PTL各濃度組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=133.21，P＜0.01)，各濃度組之間比較均P＜0.01;隨著作用時(shí)間延長，48h后對照組和PTL各濃度組的粘附率分別為67.37％±5.02％、30.21％±0.49％、22.43％±1.76％、14.71％±0.65％、8.00％±1.19％，對照組與PTL各濃度組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=533.

5、70，P＜0.01），各濃度組之間比較均P＜0.01。ELISA法結(jié)果顯示藥物作用24h后PTL各濃度組共培養(yǎng)上清液中sVCAM-1濃度顯著低于對照組(F=-545.56，P＜0.01)，PTL呈濃度依賴性抑制BMSCs分泌sVCAM-1（R=-0.99，P＜0.01)，PTL16μ mol/L組上清液中sVCAM-1濃度基本降至單獨(dú)培養(yǎng)的BMSCs組水平，兩組之間差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。RT-PCR結(jié)果顯示PTL各濃度組B

6、MSCs VCAM-1 mRNA相對表達(dá)量顯著低于對照組（F=-7006.15，P＜0.01)，PTL呈濃度依賴性抑制BMSCs VCAM-1 mRNA表達(dá)（R=-0.99，P＜0.01)，PTL16μ mol/L組VCAM-1 mRNA表達(dá)基本降至單獨(dú)培養(yǎng)的BMSCs組水平，兩組之間差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），與ELISA結(jié)果相一致。
　　結(jié)論：小白菊內(nèi)酯在體外呈劑量依賴性抑制BMSCs對Jurkat細(xì)胞的粘附，其作用機(jī)