骨髓基質(zhì)細胞對神經(jīng)前體細胞分化的作用及其機制研究.pdf

1、本研究共分為六部分.第一部分:新生大鼠中腦、海馬和項葉皮質(zhì)的神經(jīng)前體細胞的分離、體外擴增和干細胞樣特性鑒定;目的:分離、培養(yǎng)和鑒定新生大鼠中腦、海馬和頂葉皮質(zhì)的神經(jīng)前體細胞.結(jié)論:1從中腦、海馬和項葉皮質(zhì)分離、培養(yǎng)得到的細胞所具有的特性,與NSCs的連續(xù)擴增、多分化潛能和自我更新等基本特性吻合.各腦區(qū)來源的神經(jīng)元形態(tài)有所不同,說明我們分離培養(yǎng)的是NPCs.2本實驗分離得到的NPCs自然分化后,星形膠質(zhì)細胞的比例達65％左右;向神經(jīng)元方向

2、分化的比例為15％左右.當(dāng)自然分化時,以星形膠質(zhì)細胞方向的分化為主.第二部分:大鼠骨髓基質(zhì)細胞的分離培養(yǎng)和生物學(xué)特性;目的:分離培養(yǎng)成年大鼠脛、股骨來源的BMSCs,觀察其在含血清的培養(yǎng)基和無血清神經(jīng)細胞培養(yǎng)基中生物學(xué)特性.結(jié)論:1利用BMSCs的貼壁特性,用含血清的常規(guī)培養(yǎng)基和培養(yǎng)神經(jīng)細胞培養(yǎng)基培養(yǎng)成年大鼠的BMSCs,發(fā)現(xiàn)兩組細胞在形態(tài)學(xué)特征、生長方式、高度增殖生長能力等無明顯差別.2依據(jù)細胞形態(tài)學(xué)特點、生長方式和免疫熒光鑒定幾乎9

3、5％的CD71(+)、CD34(-)說明我們分離的是BMSCs,而非造血干細胞.3我們體外培養(yǎng)的單個核細胞的CFU-Fs約為正常骨髓的1.7×10<'4>倍.4神經(jīng)細胞培養(yǎng)液不能誘導(dǎo)BMSCs分化為神經(jīng)細胞.第三部分:骨髓基質(zhì)細胞對不同腦區(qū)神經(jīng)前體細胞分化為神經(jīng)元的影響;目的:觀察骨髓基質(zhì)細胞能否誘導(dǎo)新生大鼠中腦、海馬和頂葉皮質(zhì)神經(jīng)前體細胞向神經(jīng)元方向分化.結(jié)論:BMSCs及其提供的微環(huán)境可誘導(dǎo)新生大鼠不同腦區(qū)來源的NPCs的分化為高比

4、例的神經(jīng)元.第四部分:骨髓基質(zhì)細胞對新生大鼠中腦神經(jīng)前體細胞分化的影響及其機制;目的:以新生大鼠中腦神經(jīng)前體細胞為研究對象,觀察骨髓基質(zhì)細胞對神經(jīng)前體細胞分化以及神經(jīng)元存活的影響,并探討其機制.結(jié)論:1 BMSCs可明顯增加中腦來源的NPCs分化為神經(jīng)元的比例.2 BMSCs促進NPCs分化的神經(jīng)元存活和成熟.3 BMSCs對NPCs促分化、促存活的作用取決于BMSCs分泌的可溶性的因子.第五部分:骨髓基質(zhì)細胞和腦膜組織細胞對新生大鼠中

5、腦神經(jīng)前體細胞分化為神經(jīng)元作用的比較;目的:比較骨髓基質(zhì)細胞和腦膜組織細胞誘導(dǎo)新生大鼠中腦神經(jīng)前體細胞分化為神經(jīng)元的作用.結(jié)論:1 BMSCs合成和分泌的可溶性分子在誘導(dǎo)中腦NPCs分化成高比例的神經(jīng)元方面起重要作用,而這些細胞因子的產(chǎn)生是不依賴于NPCs的存在.2腦膜組織細胞也可誘導(dǎo)中腦NPCs分化出高比例的神經(jīng)元,但腦膜組織細胞條件培養(yǎng)液卻沒有誘導(dǎo)NPCs向神經(jīng)元分化的作用,提示NPCs和腦膜組織細胞緊密的空間接觸,細胞間的直接粘附

6、交互作用有助于NPCs向神經(jīng)元方向分化,也就是說可能與腦膜組織細胞表面分子和細胞外基質(zhì)有關(guān).3膠質(zhì)細胞瘤細胞株C6和成纖維瘤細胞株L929細胞株不能誘導(dǎo)NPCs的分化.第六部分:骨髓基質(zhì)細胞對中腦神經(jīng)前體細胞分化為多巴胺能神經(jīng)元的調(diào)節(jié)作用目的:探討骨髓基質(zhì)細胞對新生大鼠中腦神經(jīng)前體細胞分化多巴胺能神經(jīng)元的調(diào)節(jié)作用,并與IL-1α、GDNF、CNTF和TNF四種細胞因子比較.結(jié)論:1細胞環(huán)境中的IL-1α、GDNF可增加新生大鼠NPCs向