氨基肽酶抑制劑烏苯美司誘導人骨髓瘤細胞凋亡及其機制的研究.pdf

1、目的： 探討氨基肽酶N抑制劑(CD13抑制劑)烏苯美司在體外對人骨髓瘤細胞XG-1生長抑制、線粒體膜電位以及誘導人骨髓瘤細胞凋亡的作用及其作用機制。 方法： 常規(guī)細胞培養(yǎng)，取對數(shù)生長期人骨髓瘤XG-1細胞，制成細胞懸液，按1.5×103/孔的密度接種，培養(yǎng)24h細胞完全爬片后，烏本美司組加入500，1000μg/ml的烏本美司，空白對照組加入1640培養(yǎng)液。烏本美司作用24，48h后，用光學顯微鏡觀察細胞形態(tài)結構

2、的改變；用Rhodamine123分別標記活細胞及經(jīng)藥物作用24h，48h后的細胞，流式細胞儀檢測線粒體膜電位的變化：通過DNA片段原位末端標記法(TUNEL)檢測凋亡細胞；SABC細胞免疫法檢測細胞凋亡相關蛋白，檢測細胞凋亡相關蛋白半胱天冬酶3(caspase-3)及Bcl-2的表達，計算其分別的陽性表達并計算細胞凋亡率，統(tǒng)計學分析細胞陽性率與細胞凋亡率之間的相關性；對實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。 結果： 細胞凋亡形態(tài)：經(jīng)烏

3、苯美司1000μg/ml作用48h后的入骨髓瘤XG-1細胞可見細胞體積縮小，核質固縮，核膜核仁碎裂、溶解，胞質濃縮，出現(xiàn)典型的凋亡小體。鏡下空白對照組人骨髓瘤XG-1細胞呈圓或橢圓形，并呈聚集狀態(tài)生長，分布均勻，細胞膜完整、胞質透明清亮、細胞核一個或多個，形狀大而圓，細胞生長狀態(tài)良好；細胞免疫組化顯示入骨髓瘤XG-1細胞表面呈黃染，證實人骨髓瘤XG-1細胞表面有大量CD13存在；細胞凋亡及形態(tài)觀察：500，1000μg/ml烏苯美司作用

4、24h后細胞凋亡率分別為(23.57±5.41)％，(58.35±8.45)％；在24～48h過程中，凋亡的細胞逐漸壞死，空白對照組24，48h后細胞凋亡率均為1％。線粒體跨膜電位的變化：Rhodamine123染色結果顯示，1000μg/ml烏苯美司作用24h時線粒體膜電位熒光強度的峰值在100～1000，平均熒光強度明顯低于空白對照組(135.53±15.09，223.37±13.82，P<0.01)；作用48h時線粒體膜電位熒光強

5、度的峰值位于10～100，平均熒光強度顯著低于空白對照組(35.81±5.93，221.36±24.79，P<0.01)；凋亡相關蛋白的表達：500，1000μg/ml烏苯美司作用骨髓瘤細胞48h后，凋亡相關蛋白caspase-3表達明顯增高、Bcl-2表達則降低，并分別與凋亡率呈正相關與負相關；細胞DNA損傷：1000μg/ml烏苯美司作用24h后，TUNEL法檢測細胞凋亡可見細胞核中出現(xiàn)棕黃色顆粒，即為DNA受損標志。 結論