AKT抑制劑對胃癌細(xì)胞中順鉑誘導(dǎo)凋亡的影響及其機(jī)制的探討.pdf

1、目的：觀察Akt抑制劑MK-2206對胃癌細(xì)胞系A(chǔ)GS和MKN28，MKN45中順鉑對細(xì)胞生長抑制及細(xì)胞凋亡的影響，檢測順鉑→MK-2206對胃癌細(xì)胞系A(chǔ)GS和MKN28，MKN45 AKT通路中下游底物p-AKT,PARP,Bcl-2表達(dá)水平的影響。
　　方法：分單藥Cis組和MK-2206組及相繼使用Cis→MK-2206聯(lián)合用藥組，采用PI/FITC法測定三種胃癌細(xì)胞系A(chǔ)GS、MKN28、MKN45經(jīng)上述藥物組處理后的凋亡狀

2、況。篩選出對MK-2206反應(yīng)敏感的細(xì)胞系。MTT法測定Cis組和MK-2206組及相繼使用DDP→MK-2206聯(lián)合用藥組對胃癌細(xì)胞增殖抑制的影響。WB方法檢測三種細(xì)胞系經(jīng)DDP(10μg/ml24h)和DDP(10μg/ml12)+MK-2206(8μM36h)處理過后Akt、P-Akt、PARP和Bcl-2的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：1. Annexin V/PI結(jié)果示：順鉑(2μg/ml36h)可導(dǎo)致AGS細(xì)胞凋亡（6.1％）

3、，單獨應(yīng)用MK-2206(8μM)作用AGS細(xì)胞時凋亡并不明顯（1.45%），但MK-2206可增強(qiáng)順鉑對AGS細(xì)胞誘導(dǎo)的凋亡（15.75%）。順鉑、MK-2206對MKN28細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用微弱，聯(lián)合用藥時MK-2206對順鉑誘導(dǎo)MKN28細(xì)胞凋亡的影響也較微弱。順鉑、MK-2206對MKN45細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用并不明顯，聯(lián)合用藥時MK-2206對順鉑誘導(dǎo)MKN45細(xì)胞凋亡也無明顯影響。
　　2. MTT方法測定結(jié)果：單用DD

4、P對AGS細(xì)胞增殖有抑制作用，而且隨著藥物濃度0.25μg/ml，0.5μg/ml，1μg/ml,2μg/ml,4μg/ml遞增，抑制效果增強(qiáng)。單用MK-2206濃度0.001μM，0.01μM，0.1μM，1μM，10μM測的OD值大于0.7，無法做線性分析。相繼使用DDP→MK-2206(10μM)聯(lián)合用藥時對AGS細(xì)胞增殖抑制作用明顯增強(qiáng)，且兩組之間具有統(tǒng)計學(xué)意義,P<0.05。
　　3.聯(lián)合用藥DDP→MK-2206可表現(xiàn)

5、出對AKT通路及其下游底物顯著的影響，單獨用順鉑（10μM24h）藥物可導(dǎo)致PARP（聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶）在AGS細(xì)胞中裂解，當(dāng)聯(lián)合應(yīng)用MK-2206（10μM48h）后PARP裂解產(chǎn)物明顯增加。說明MK-2206可協(xié)同順鉑誘導(dǎo)凋亡。Western blot分析結(jié)果表明AGS細(xì)胞在順鉑→MK-2206處理下P-akt、Bcl-2的表達(dá)較單用DDP藥物組和對照組明顯減少，而總的AKT表達(dá)并無明顯變化。
　　結(jié)論：因此，我們可以