p12-LOX抑制劑對(duì)胃癌細(xì)胞的作用及其機(jī)制的初步探討.pdf

1、胃癌是最常見的惡性腫瘤之一，我國(guó)胃癌發(fā)病率占惡性腫瘤的第二位，死亡率居惡性腫瘤首位。研究表明胃癌的發(fā)生與花生四烯酸(AA)的代謝途徑有關(guān)，12-LOX是脂氧合酶家族中的成員之一，是催化AA轉(zhuǎn)化為12-HETE的關(guān)鍵酶，12-LOX(特別是p12-LOX)及12-HETE與惡性腫瘤的關(guān)系已成為近年的研究重點(diǎn)。BAI是從中草藥黃芩中提取的一種具有抗炎、抗氧化和抗癌活性的黃酮類化合物，是p12-LOX的選擇性抑制劑，在體內(nèi)和體外研究顯示有較強(qiáng)

2、的抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和誘導(dǎo)凋亡的作用，目前有關(guān)BAI對(duì)胃癌細(xì)胞作用的研究報(bào)道較少。 1. 胃癌SGC-7901細(xì)胞中p12-LOX的表達(dá)情況 目的：觀察p12-LOX在胃癌SGC-7901細(xì)胞中的表達(dá)情況。 方法：RT-PCR檢測(cè)SGC-7901細(xì)胞中p12-LOX mRNA的表達(dá)及Western Blot檢測(cè)SGC-7901細(xì)胞中p12-LOX蛋白的表達(dá)。 結(jié)果：SGC-7901細(xì)胞的RT-PCR產(chǎn)物經(jīng)瓊

3、脂糖電泳結(jié)果，可見一條337 bp的p12-LOX基因擴(kuò)增帶和一條651bp的β-actin內(nèi)參基因擴(kuò)增帶；Westem Blot結(jié)果發(fā)現(xiàn)，SGC-7901細(xì)胞中存在p12-LOX(75KD)蛋白的表達(dá)。 結(jié)論：胃癌SGC-7901細(xì)胞中存在p12-LOX mRNA及蛋白表達(dá)。 2. BAI對(duì)胃癌SGC-7901細(xì)胞增殖及周期的影響 目的：研究BAI對(duì)胃癌SGC-7901細(xì)胞增殖及細(xì)胞周期的影響。 方法：

4、分別采用MTT染色法及FCM技術(shù)檢測(cè)不同濃度BAI對(duì)SGC一7901細(xì)胞增殖及周期的影響。 結(jié)果：隨BAI終濃度(0、5、10、20、40、80μmol/L)增加和作用時(shí)間(24、48、72 h)的延長(zhǎng)，細(xì)胞存活率明顯下降；FCM分析表明：隨BAI濃度的增高，G<,0>/G<,1>期細(xì)胞由(62.27±3.20)％降低到(29.36±1.37)％，而S期細(xì)胞的比例從(23.18±1.39)％升高到(68.21±1.64)％。

5、 結(jié)論：BAI能抑制SGC-7901細(xì)胞的增殖，并呈一定的時(shí)間、濃度依賴性；BAI可改變細(xì)胞周期的分布，并呈一定的濃度依賴性。 3. BAI對(duì)胃癌SGC-7901細(xì)胞VEGF表達(dá)的影響及意義 目的：研究BAI對(duì)胃癌SGC-7901細(xì)胞VEGF表達(dá)的影響及意義。 方法：RT-PCR方法檢測(cè)BAI對(duì)SGC-7901細(xì)胞VEGF mRNA表達(dá)的影響，ELISA險(xiǎn)測(cè)BAI對(duì)SGC-7901細(xì)胞VEGF蛋白表達(dá)的影響。

6、 結(jié)果：經(jīng)不同濃度BAI作用6 h后SGC-7901細(xì)胞的RT-PCR產(chǎn)物經(jīng)分析表明，可見六條長(zhǎng)度333 bp、深淺不一致的VEGF基因擴(kuò)增帶和六條長(zhǎng)度371 bp、深淺基本一致的GAPDH基因擴(kuò)增帶。用GEL-Pro圖像分析軟件半定量分析條帶的強(qiáng)弱，結(jié)果表明：BAI作用6 h后VEGF mRNA表達(dá)明顯低于對(duì)照組(p<0.05，除5μmol/L)，而且隨著BAI濃度的逐漸增加，VEGF mRNA表達(dá)量逐漸降低，提示VEGFmR