聯(lián)合抑制COX-2與5-LOX途徑對(duì)胃癌細(xì)胞的影響及機(jī)制研究.pdf

1、目的：通過單獨(dú)及聯(lián)合應(yīng)用環(huán)氧合酶-2抑制劑尼美舒利和5一脂氧合酶抑制劑AA861處理胃癌AGS細(xì)胞，探討聯(lián)合抑制COX-2和5-LOX兩條通路對(duì)胃癌AGS細(xì)胞的影響及其可能的作用機(jī)制。 方法：AGS細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)，取對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞做為實(shí)驗(yàn)組。以相差顯微鏡觀察藥物處理前后的細(xì)胞形態(tài)改變；用四氮唑藍(lán)(thiazolyl blue tetrazolium bromide/MTT)法檢測(cè)細(xì)胞生長增殖情況；采用脫氧核糖核酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的d

2、UTP缺口末端標(biāo)記法(TUNEL)和丫啶橙/溴化乙啶(AO/EB)染色法檢測(cè)細(xì)胞凋亡率，以．DNA瓊脂糖凝膠電泳法觀察凋亡細(xì)胞DNA的改變。逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)AGS細(xì)胞的5-LOXmRNA表達(dá)水平；免疫印跡法(Western blot)檢測(cè)5-LOX及磷酸化Akt(p-Akt)蛋白的表達(dá)水平。 結(jié)果：1、相差顯微鏡觀察，藥物處理組細(xì)胞與對(duì)照組相比，形態(tài)發(fā)生明顯改變。2、MTT法與TIJNEL染色法表明，尼美

3、舒利呈時(shí)間、劑量依賴性抑制AGS細(xì)胞增殖，尼美舒利處理組的細(xì)胞凋亡率隨著劑量的增加而升高。3、MTT(AA861組vs兩藥組，p<0.01；尼美舒利vs兩藥組，p<0.05)、TUNEL染色法(單藥組vs兩藥組，p<0.01)、AO/EB染色法(單藥組vs兩藥組，p<0.01)和DNA瓊脂糖凝膠電泳法顯示，兩藥組與單藥組比較，細(xì)胞增殖抑制，凋亡增加。4、RT-PCR和western blot法檢測(cè)5-LOXmRNA和蛋白表達(dá)實(shí)驗(yàn)中，尼美

4、舒利及兩藥聯(lián)合作用均使細(xì)胞5-LOX表達(dá)上調(diào)(p<0.01)，但AA861單獨(dú)作用卻不影響5-LOX表達(dá)(p>0.05)。兩藥聯(lián)合作用48h，對(duì)AGS細(xì)胞5-LOXmRNA及蛋白表達(dá)沒有交互作用(p>0.05)。5、western blot檢測(cè)p-AKt蛋白表達(dá)的實(shí)驗(yàn)中，尼美舒利組p-AKt表達(dá)升高(p<0.01)，AA861組和兩藥組的p-AKt蛋白表達(dá)均降低(p<0.05)，且兩藥組p-AKt蛋白表達(dá)量最低。兩藥聯(lián)合作用48h，對(duì)A

5、GS細(xì)胞p-AKt蛋白表達(dá)具有交互作用(p<0.01). 結(jié)論：COX-2抑制劑尼美舒利和5-LOX抑制劑AA861可抑制胃癌AGS細(xì)胞增殖，并誘導(dǎo)凋亡。而兩藥聯(lián)合作用COX-2與5-LOX兩條通路，能更有效地抑制AGS細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)凋亡。AGS細(xì)胞中存在5-LOX及AKt的表達(dá)，在尼美舒利作用下，細(xì)胞5-LOX和p-AKt表達(dá)升高；而AA861卻不影響細(xì)胞5-LOX表達(dá)，但可降低磷酸化AKt的蛋白表達(dá)量，同時(shí)，兩藥聯(lián)合作用則促