Survivin、COX-2與膽管癌的血管生成及COX-2途徑對(duì)膽管癌細(xì)胞血管生成相關(guān)因子影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、膽管癌是膽道常見的惡性腫瘤，雖然在膽管癌診治方面取得一些進(jìn)展，但其預(yù)后仍較差，其中重要的原因是早期診斷困難，而當(dāng)疾病處在進(jìn)展期時(shí)，腫瘤細(xì)胞往往已通過(guò)血道、淋巴轉(zhuǎn)移，從而導(dǎo)致外科根治性切除率低。隨著血管生成在腫瘤發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后中作用和地位的確立，抗腫瘤血管生成策略成為目前腫瘤治療研究的熱點(diǎn)。既往認(rèn)為膽管癌是一種血管分布(相對(duì)肝癌)較少的腫瘤，但隨著對(duì)膽管癌形成分子機(jī)制研究的深入，血管生成在膽管癌發(fā)生發(fā)展中的重要性已逐步被重視。Survi

2、vin是一種結(jié)構(gòu)獨(dú)特的凋亡蛋白抑制因子家族的成員，特異地表達(dá)于人和鼠的胚胎發(fā)育組織以及多數(shù)人類腫瘤細(xì)胞。研究表明，Survivin在細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期的基因調(diào)控中發(fā)揮重要作用，而且在腫瘤血管新生調(diào)節(jié)中是至關(guān)重要的，使其成為一個(gè)非常有吸引力的癌癥治療靶點(diǎn)；環(huán)氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)是前列腺素生物合成的限速酶，大量研究表明COX-2表達(dá)增強(qiáng)與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，COX-2上調(diào)可能是腫瘤發(fā)生過(guò)程中一個(gè)重要

3、的限速步驟，COX-2可能通過(guò)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖和抑制細(xì)胞凋亡、促進(jìn)腫瘤惡性轉(zhuǎn)化、促進(jìn)腫瘤血管生成等機(jī)制參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展；關(guān)于Survivin和COX-2在腫瘤血管生成角色方面的報(bào)道并不多見。我們前期的研究發(fā)現(xiàn)Survivin和COX-2基因參與了膽管癌細(xì)胞增殖和凋亡過(guò)程，本實(shí)驗(yàn)欲了解Survivin、COX-2與膽管癌血管生成的關(guān)系及膽管癌血管生成的可能機(jī)制，為膽管癌的抗腫瘤血管生成治療提供新依據(jù)。 目的：研究Survivin

4、、COX-2與膽管癌血管生成的關(guān)系及膽管癌血管生成的可能機(jī)制。 方法：采用SP免疫組化染色檢測(cè)Survivin、COX-2、VEGF和MVD在膽管癌臨床病理標(biāo)本中的表達(dá)。膽管癌細(xì)胞株QBC939于體外培養(yǎng)，每日倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況。應(yīng)用不同濃度的選擇性環(huán)氧合酶-2 抑制劑尼美舒利分別處理細(xì)胞，于作用的不同時(shí)間收集細(xì)胞，應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Enzyme-linkedimmunoadsordent assay，ELISA)

5、檢測(cè)藥物處理前后培養(yǎng)細(xì)胞上清液中分泌的VEGF濃度；應(yīng)用RT-PCR檢測(cè)藥物處理前后膽管癌細(xì)胞株QBC939中COX-2/VEGF/Survivin基因的表達(dá)變化；采用SP免疫組化染色觀察藥物處理前后膽管癌細(xì)胞株QBC939中COX-2/VEGF/Survivin蛋白的表達(dá)情況。 結(jié)果： (1)免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果顯示膽管癌組織 MVD 值、COX-2、VEGF和Survivin陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于正常膽管組織(P<0.05)；(2)

6、膽管癌組織COX-2基因的表達(dá)與VEGF表達(dá)、MVD值成正相關(guān)；(3)膽管癌組織Survivin基因表達(dá)與VEGF表達(dá)、MVD值成正相關(guān)；(4)ELISA表明隨著尼美舒利濃度增加，膽管癌細(xì)胞QBC939上清液中分泌的VEGF濃度下降；(5)免疫組化測(cè)定顯示隨著尼美舒利濃度增加，COX-2、VEGF和Survivin在QBC939細(xì)胞漿中表達(dá)下調(diào)；(6)RT-PCR測(cè)定顯示隨著尼美舒利濃度增加，COX-2、VEGF和Survivin在QB