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1、國(guó)內(nèi)圖書分類號(hào):X703 國(guó)際圖書分類號(hào):628.35 工學(xué)博士學(xué)位論文 產(chǎn)乙醇桿菌屬突變菌株 YR-3 的產(chǎn)氫行為 及其突變機(jī)制 博 士 研究生: 鄭國(guó)香 導(dǎo) 師: 任南琪 教授 申 請(qǐng) 學(xué) 位: 哈爾濱工業(yè)大學(xué)博士 學(xué) 科 、 專 業(yè): 環(huán)境工程 所 在 單 位: 市政環(huán)境工程學(xué)院 答 辯 日 期: 2008 年 3 月 授予學(xué)位單位: 哈爾濱工業(yè)大學(xué) 摘 要 - I - 摘 要 人類的生存和發(fā)展都離不開能源,能源的短缺已經(jīng)成
2、為當(dāng)前國(guó)際社會(huì)急需解決的難題之一;氫能作為一種清潔、高效、安全、可持續(xù)的新能源,被視為 21 世紀(jì)最具發(fā)展?jié)摿Φ哪茉?,已逐漸成為能源界關(guān)注的熱點(diǎn)。 發(fā)酵法生物制氫技術(shù)在工藝改進(jìn)、運(yùn)行調(diào)控、擴(kuò)大原料利用范圍及高效菌株篩選等方面都取得相當(dāng)大的進(jìn)展。決定發(fā)酵法生物技術(shù)實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化的關(guān)鍵指標(biāo)是提高系統(tǒng)的產(chǎn)氫能力和降低生產(chǎn)成本。在菌種產(chǎn)氫能力方面,各國(guó)學(xué)者致力于從自然界或產(chǎn)氫反應(yīng)器中分離篩選更高產(chǎn)氫的野生菌株,同時(shí)也利用傳統(tǒng)的誘變手段及基因工程手段
3、改良產(chǎn)氫菌種,以縮短獲得高產(chǎn)氫菌株的歷程。 針對(duì)提高野生菌株的產(chǎn)氫能力,本文改進(jìn)傳統(tǒng)的育種手段對(duì)野生產(chǎn)氫菌Ethanoligenens harbinense ZGX4 進(jìn)行誘變育種,經(jīng)穩(wěn)定性考察后得到一株產(chǎn)氫能力可提高 40%左右的產(chǎn)氫突變株 YR-3,并對(duì)其發(fā)酵行為進(jìn)行了深入探討。利用 AFLP 技術(shù)及雙相蛋白電泳(2-DE)技術(shù)分別對(duì)其進(jìn)行酶切后的基因多態(tài)性和蛋白質(zhì)組學(xué)分析,初步分析了高產(chǎn)突變菌株的產(chǎn)氫代謝突變機(jī)制。 通過(guò)對(duì)比不同誘
4、變因子對(duì)產(chǎn)氫細(xì)菌 ZGX4 的誘變效應(yīng),確定紫外線+亞硝酸復(fù)合誘變方式對(duì)產(chǎn)氫細(xì)菌 ZGX4 的誘變效果最佳。利用這種處理方式篩選到產(chǎn)氫能力提高較大而且有較好絮凝能力的突變菌株。對(duì)分離培養(yǎng)基LM-1 進(jìn)行了簡(jiǎn)化,結(jié)合直接涂布分離培養(yǎng)法,采用紫外線和亞硝酸復(fù)合誘變篩選獲得一株高效產(chǎn)氫突變菌株 YR-3,生理生化指標(biāo)和形態(tài)特征分析結(jié)果表明,YR-3 的表型上已經(jīng)發(fā)生了明顯變化。 采用間歇培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)分別對(duì) YR-3 的培養(yǎng)條件進(jìn)行單因子探討,并進(jìn)
5、一步利用中心組合設(shè)計(jì)和響應(yīng)面法(RSM)對(duì)影響 YR-3 發(fā)酵產(chǎn)氫能力的四種因素(mC/mN、PBS 濃度、初始 pH、生物素)進(jìn)行了分析,確定 YR-3 發(fā)酵產(chǎn)氫的最適培養(yǎng)條件:溫度 37±1 ℃,初始 pH 6.0,磷酸鹽緩沖液 80 mM,mC/mN 5.5,生物素 1.4 mg/L。 間歇培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)對(duì)比野生菌株 ZGX4 菌株和突變菌株 YR-3 的產(chǎn)氫性能,結(jié)果表明,突變株 YR-3 仍然為典型的乙醇厭氧發(fā)酵細(xì)菌,液相
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