尤力克檸檬citruslimonl.burm.f.小種子植株遺傳多樣性研究

1、四川農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文尤力克檸檬（Citrus limon（L.）Burm.F.）小種子植株遺傳多樣性研究姓名：祝進申請學位級別：碩士專業(yè)：果樹學指導教師：王永清20070501摘要本實驗通過離體培養(yǎng)和溫室翁播的方式獲得了大量尤力克檸檬的小種子苗，再通過R A P D 技術、染色體根尖壓片技術、形態(tài)觀察等手段，對這些小種子苗的遺傳多樣性進行了較深入的研究，結果表明：1 ．，J 、種子的界定及其出現(xiàn)頻率本實驗對1 5 6 個成熟尤力克檸

2、檬中的大、小種子出現(xiàn)情況做了統(tǒng)計，結果表明：飽滿小種子的平均粒重只有O ．0 3 4 克，約為普通種子粒重的1 ／4 。根據(jù)已有的文獻資料和實際的操作，我們把重量只有或不及普通種子粒重1 ／3 的種子稱為小種子，其中包括能達到要求的癟粒小種子。在出現(xiàn)頻率上，平均每個果實中有O ．8 6 5 顆飽滿小種子和1 ．3 5 9 顆癟粒小種子存在。飽滿小種出現(xiàn)頻率為3 ．5 ％，癟粒小種子出現(xiàn)頻率為5 ．6 ％，總的小種子出現(xiàn)頻率為9 ．1 ％

3、。2 ．離體培養(yǎng)( 1 ) 最佳接種培養(yǎng)基為不附加任何其它物質(zhì)的M S 基本培養(yǎng)基，萌發(fā)率可達9 0 ．O ％，成苗率可達8 5 ．O ％。( 2 ) 最佳增殖培養(yǎng)基為M S + 0 ．5 m g ／L 6 一B A + 0 ．5 m g ／L K T + 0 ．I m g ／L N A A ，平均增殖倍數(shù)可達4 ．4 。( 3 ) 最佳生根培養(yǎng)基為I ／2 M S + I ．0 r n g ／L N A A + 0 ．5 m g ／L

4、 I B A ，平均每芽生根數(shù)可達8 ．1 4 條。3 ．R A P D 鑒定( 1 ) 本實驗采用改良C T A B 法提取D N A ，結果表明：幼嫩的組培苗葉片提取效果相當好，不易褐化，得到的D N A 量大，產(chǎn)率達到1 9 8 —3 7 2 n g ／m g 鮮葉；質(zhì)量好，A 2 6 0 ／A 2 帥的比值為1 ．7 l 一1 ．9 2 ，無需去除R N A 就能用于R A P D 分析，符合R A P D反應的要求。( 2 )

5、 對反應體系的優(yōu)化結果表明，最佳的反應體系為：反應總體積2 5 1 a l ，其中引物濃度1 ．5 1 a m o l ／L ，M 9 2 + 的濃度為2 ．5m m o l ／L ：d N T P 的濃度為1 5 0 1 a m o I ／L ；T a q 酶的濃度為】．4 U ：B u f f e r 2 5 m m o l ／L ；D N A 模板濃度為4 0 n g 。加去離子水補充總體積至2 5 1 a 1 。( 3 ) 反應