柚(citrusgrandis(l.)osbeck)單染色體aflp特異分子標(biāo)記體系的構(gòu)建

1、福建農(nóng)林大學(xué)碩士學(xué)位論文柚（Citrus grandis（L.）Osbeck）單染色體AFLP特異分子標(biāo)記體系的構(gòu)建姓名：柳燕貞申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：陳偉;王平20100401福建農(nóng)林大學(xué)碩士學(xué)位論文A b s t r a c tP o m o l e ( C i t r u s g r a n d i s ( L ．) O s b e c k ) i s o n e o f t h em o s ti

2、m p o r t a n t f r u i ti nc i t r u s ．H o w e v e r ' i ti s h a r dt o c o n s t r u c ta c c u r a t e g e n e t i cm a po fp o m o l e ，b e c a u s e o ft h ec o m p l e xg e n e t i cb a c k g r o u n d ，l o n

3、 g g r o w t h c y c l e ．一W h i c h c a u s ed i f f i c u l t y i n t h er e s e a r c ho fp o m o l eg e n o m i ca n a l y s i s ，m o l e c u l a r m a r k e ra s s i s t e db r e e d i n g ，a n dt h eg e n ec l o n

4、eo f s o m ei m p o r t a n th o r t i c u l t u r a lt r a i t s ．T oo b t a i ns o m e s p e c i f i c m o l e c u l a rm a r k e r si n p o l o m es i n g l e c h r o m o s o m e ，e s t a b l i s ham o l e c u l a rm

5、a r k e rs y s t e m t oi d e n t i f i e ds i n g l ec h r o m o s o m e ．C o n s e q u e n t l y , i tc a ne s t a b l i s ha s i n g l ec h r o m o s o m el i b r a r y , w h i c h c a ng r e a t l y r a i s e t h ew

6、o r ke f f i c i e n c y i n d r a w i n gp o l o m eg e n e t i cm a p p i n g ．O nt h i s b a s i s ，A F L Pm e t h o dW a su s e d t o i d e n t i f i e d p o m o l es p e c i f i cm o l e c u l a r m a r k e r s ，a n

7、 da c q u i r e t h e f o l l o w i n gm a j o r r e s u l t s ：1 ．T h e i m m a t u r ee m b r y oo f p o i o m e ( C i t r u sg r a n d i s ) c u l t i v a l ‘' g u a n x i ”w a su s e di n a l l e x p e r i m e n

8、t s ．W ei s o l a t e d5 6s i n g l ec h r o m o s o m e s b yg l a s sn e e d l e ，a n dt h e nc o n d u c t e d e n z y m e d i g e s t i o n ，l i g a t i o nt oa d a p t o r s ，t w i c eL A ．P C R a m p l i f i c a t

9、i o n ．A n d w e c o n s t r u c t e d s i n g l e c h r o m o s o m e l i b r a r y o f p o m o l e ．A g a r o s e g e le l e t r o p h o r e s i sa n a l y s i ss h o w st h a tD N A a m p l i f i e df r a g m e n t sm

10、 a i n l yd i s t r i b u t e di n3 0 0 “ - - 2 0 0 0 b p ，a n dt h e r e a r e s o m ed i f f e r e n c e s i n D N A a m p l i f i e df r a g m e n t s o fd i f f e r e n ts i n g l ec h r o m o s o m e s ．2 ．W es c r

11、e e n e d L ／Xa n d F ／Ii n4 2p r i m e r p a i r s ．T h e n w e u s e dA F L P t oa n a l y z et h e 5 6 s i n g l e c h r o m o s o m e s ，a n d o b t a i n e d ac l e a rA F L Pf i n g e r p r i n t s ．U P G M AC l u

12、s t e ra n a l y s i ss h o w e dt h a t5 6s i n g l ec h r o m o s o m e sc a n c l a s s i f yi n t o 11 g r o u p sa tt h es i m i l a r i t yc o e f f i c i e n to f 0 ．7 6 ．3 ． A F L Pa n a l y s i s o fg e n e t i

13、c p o l y m o r p h i s m s h o w e d t h a t t h e r e a le3 6 1d i f f e r e n t i a lf r a g m e n t s ．W eo b t a i n e d 3 2s i n g l ec h r o m o s o m e s A F L P s p e c i f i cm o l e c u l a rm a r k e r so f 1

14、2 9d i f f e r e n tf r a g m e n t sb yS o u t h e r n b l o t t i n ga n a l y s i s ．T h e nw e d i s c u s s e dt h e d i s t r i b u t i o no f A F L P s p e c i f i cm o l e c u l a r m a r k e r s ，a n dc o n f i

15、r m e d t h e9 g r o u p so f2 2s i n g l ec h r o m o s o m e s ．4 ．S i n g l e c h r o m o s o m e s p e c i f i c m o l e c u l a r m a r k e r sw e r e s t u d i e db y D N As e q u e n c i n gd i r e c t l y , a n d