ndvsddy02株f基因的克隆與序列分析及e.colicpgdna在新城疫疫苗上的應(yīng)用研究

1、山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文NDV Sddy-02株F基因的克隆與序列分析及E.coli CpG-DNA在新城疫疫苗上的應(yīng)用研究姓名：徐守振申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：崔言順;沈志強(qiáng)2003.6.10山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士研究生論文N D VS d d y 一0 2 株F 基因的克隆與序列分析及E ．C OI - O p G —D N A 在新城疫疫苗上的應(yīng)用研究捅要為探討強(qiáng)毒新城疫病毒的分子生物學(xué)特性和新的疫苗免疫防制技術(shù)，本研

2、究分離鑒定了一地方株新城疫病毒( C h i c k e n ／S h a n d o n g ／D o n g y i n g ／2 0 0 2 ，以下簡(jiǎn)稱N D V S d d y - 0 2 ) ，對(duì)其生物學(xué)特性進(jìn)行了研究，并用R T —P C R對(duì)該分離株F 基因重要片段進(jìn)行了克隆和序列分析。在此研究基礎(chǔ)上，用N D VS d d y 一0 2 株和C 。。標(biāo)準(zhǔn)弱毒株制備了復(fù)合新城疫蜂膠滅活疫苗，同時(shí)將E ．c o l i C

3、p G —D N A 作為佐劑以不同劑量分別加入該疫苗和C 。。弱毒疫苗中，對(duì)比研究E ．c o l i C p G —D N A 對(duì)此兩類疫苗的免疫增強(qiáng)作用，為研制更為高效、安全的復(fù)合佐劑疫苗提供科學(xué)依據(jù)。本課題分三部分進(jìn)行研究：，第一部分：N O VS d d y - 0 2 株的分離鑒定及生物學(xué)特性研究，對(duì)從山東東營(yíng)某雞場(chǎng)分離到的一株新城疫病毒( N D VS d d y 一0 2 ) 進(jìn)行了生物學(xué)特性研究。經(jīng)S P F 雞胚接種

4、培養(yǎng)后，其J I F 。代尿囊液血凝( H A ) 效價(jià)為2 “，新城疫標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清對(duì)4 個(gè)單位分離毒的血凝抑制( H I ) 效價(jià)為2 8 ，對(duì)1 0 0E L D 。J I F 。的中和效價(jià)為1 ：2 5 6 ，表明該分離株為新城疫病毒。分離株的雛雞腦內(nèi)接種致病指數(shù)( I C P I ) 為1 ．8 7 ，靜脈接種致病指數(shù)( I V P I )為2 ．6 2 ，最小致死量平均雞胚死亡時(shí)間( M D T ) 為5 3 ．4 ，血凝解脫

5、快，血凝素?zé)岱€(wěn)定性差。該分離株毒力稍強(qiáng)于標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)毒株F 。E 。，在血清中和試驗(yàn)上也與標(biāo)準(zhǔn)株有一定差別，表明N D V S d d y 一0 2 株為發(fā)生了一定程度變異的新城疫強(qiáng)毒株。I t ．，第二部分：N D VS d d y - 0 2 株F 基因的克隆與序列分析塔試驗(yàn)設(shè)計(jì)了一對(duì)特異性引物，應(yīng)用R T - P C R 技術(shù)擴(kuò)增出N D VS d d y 一0 2 株F 基因含裂解位點(diǎn)區(qū)3 6 3 b p 片段，同時(shí)進(jìn)行克隆和序列測(cè)定