NDV強(qiáng)毒株的分離鑒定與復(fù)合新城疫蜂膠滅活疫苗的研究.pdf

1、該研究從山東流行烈性傳染病的雞群中分離出7株具有血凝活性的病毒,該7株病毒的血凝活性均能被新城疫LaSota株標(biāo)準(zhǔn)陽性血清所抑制,但病毒不能被中和,仍能致死雞胚.經(jīng)分離鑒定,分離毒均為新城疫病毒株,通過雞胚半數(shù)致死量(ELD<,50>)、最小致死量致死雞胚的平均時(shí)間(MDT)、1日齡雛雞腦內(nèi)致病指數(shù)(ICPI)、6周齡雛雞靜脈內(nèi)致病指數(shù)(IVPI)、血凝解脫及血凝素穩(wěn)定性試驗(yàn)等表明:7株分離毒株均為新城疫病毒強(qiáng)毒株,其毒力與標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)毒株F

2、<,48>E<,9>株相似.對(duì)4株具有一定代表性的NDV分離株的F基因進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增和序列分析,根據(jù)基因裂解位點(diǎn)的氨基酸序列推測,其中1株屬于弱毒株,3株屬于強(qiáng)毒株;核苷酸序列及其推導(dǎo)的氨基酸序列比較結(jié)果表明:3株強(qiáng)毒株與Clone30基因核苷酸序列的同源性在83.6﹪-84.0﹪之間;與F<,48>E<,9>典型NDV強(qiáng)毒株同源性在86.5.6﹪-88.3﹪之間,推導(dǎo)的氨基酸序列同源性與Clone-30株在85.9﹪-87.0﹪

3、之間;與F<,48>E<,9>典型NDV強(qiáng)毒株在89.1﹪-91.3﹪之間;利用MegAlign軟件繪制了NDV的系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹,其結(jié)果表明,3株分離強(qiáng)毒株為Ⅶ基因型,弱毒株為基因Ⅱ型.通過雞胚接種的方法研究了蜂膠乙醇浸出物(EEP)對(duì)NDVClone-30株的滅活作用,結(jié)果表明,0.1-10mg/ml的蜂膠乙醇浸出物(EEP)對(duì)NDVClone-30株的滅活作用,并且這種滅活作用與溫度、乙醇濃度成正比,在3-30min內(nèi)與作用時(shí)間無關(guān)

4、.用NDVClone-30株和分離毒株分別接種非免疫雞胚,制備抗原液,經(jīng)甲醛滅活后與純化的天然免疫增強(qiáng)劑蜂膠乳化,研制成功復(fù)合新城疫蜂膠滅活疫苗,對(duì)制品的安全性和免疫原性進(jìn)行了測定,對(duì)3-6周齡易感雛雞以2倍使用劑量肌肉注射,安全性良好,對(duì)1日齡雛雞接種1個(gè)使用劑量,進(jìn)行急性毒性試驗(yàn)觀測,15天生長曲線表明,對(duì)雛雞無影響,對(duì)3-6周齡雛雞注射1個(gè)使用劑量,每批疫苗免疫10只雞,免疫5-32天雞血清中ND血凝抑制(HI)抗體的幾何平均滴度