雞新城疫強(qiáng)毒株融合蛋白部分序列的遺傳變異分析及抗原性研究.pdf

1、本研究對河北省保定地區(qū)雞場分離到的兩株雞新城疫病毒(NDV)強(qiáng)毒株(代號分別為HBB和HBW)，以及國內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)毒株F48E9、疫苗株LaSota的F蛋白裂解位點(diǎn)附近的基因進(jìn)行了RT-PCR擴(kuò)增、克隆及序列測定。對克隆測序的4株雞新城疫病毒的F基因與不同基因型的代表株進(jìn)行同源性比較和毒力分析。并且對這4株新城疫病毒及Genbank上國內(nèi)外有代表性的33株新城疫病毒共計37株F基因的389bp(1bp～389bp)長度的核苷酸片段及其相應(yīng)的

2、氨基酸序列(1aa～130aa)進(jìn)行比較，建立系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹，并確定測序的4株新城疫病毒的基因型。結(jié)果顯示，疫苗株LaSota同兩分離株的同源性較低，核苷酸的同源性在83.8﹪～84.1﹪之間，氨基酸的同源性在84.4﹪～86.6﹪之間；國內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)毒F48E9與LaSota及兩分離株的同源性較低，核苷酸的同源性在85.6﹪～86.4﹪之間，氨基酸的同源性在84.4﹪～86.6﹪之間；兩分離株核苷酸序列同源性較低，為88.2﹪，但氨基酸序

3、列同源性較高，為93.9﹪。F48E9株F蛋白的裂解位點(diǎn)為112RRQRRF117，兩株強(qiáng)毒株F蛋白的裂解位點(diǎn)為112RRQRRF117，符合強(qiáng)毒株裂解位點(diǎn)的特征，同毒力測定結(jié)果相一致。兩分離株的F基因都沒有堿基的缺失和插入，但有多處點(diǎn)突變，分散存在。分離株的55～61、72、84～89及128～130之間的氨基酸均高度保守，突變的氨基酸位點(diǎn)多集中在101～111之間。分離株HBB為基因Ⅵ型，分離株HBW為基因Ⅶ型。 同時，采用

4、分離的基因Ⅶ型新城疫病毒毒株制成油乳劑滅活疫苗，分別以分離株和LaSota株的滅活苗免疫試驗雞，進(jìn)行疫苗免疫效果比較和交叉免疫保護(hù)試驗。結(jié)果顯示，免疫組與對照組相比HI抗體效價差異顯著，分離株滅活苗免疫組產(chǎn)生的HI抗體效價和LaSota滅活苗免疫組的抗體效價相差不明顯，兩組的升降規(guī)律也基本一致；分離株滅活苗免疫組(HI抗體效價為6log2以上時)在免疫后21、28和35天對相同劑量F48E9標(biāo)準(zhǔn)毒株和兩分離株的攻毒均給予100﹪的保護(hù)，