新城疫F48E9毒株和Lasota毒株感染雞胚成纖維細胞后部分細胞因子差異表達的研究.pdf

1、雞新城疫是由新城疫病毒引起的一種高度接觸性、毀滅性的傳染病，給我國養(yǎng)禽業(yè)造成了巨大的經濟損失。根據新城疫病毒感染雞的臨床癥狀，將其分為3類，即速發(fā)型（強毒株）、中發(fā)型（中等毒力毒株）及緩發(fā)型（弱毒株），不同毒株的致病性不同。雞細胞因子是介導免疫系統(tǒng)的細胞與細胞之間信號傳遞的重要可溶性介質。雞細胞因子在免疫調節(jié)和抗感染免疫中具有重要的作用。因此，為了更好的了解病原致病的潛在的過程和致病的分子機理，研究細胞因子的表達情況可以為復雜的免疫應答

2、提供依據。本研究從細胞水平入手，以感染新城疫強、弱毒的雞胚成纖維細胞為模型，研究了9個細胞因子在雞胚成纖維細胞中的表達情況，為病毒感染后細胞因子在雞胚成纖維細胞當中生物學功能以及新城疫病毒感染的分子機理的研究提供依據。
　　 根據GenBank上雞干擾素-α(IFN-α)、干擾素-γ（IFN-γ）、白介素2(IL-2)、白介素6（IL-6）、白介素10(1L-10)、白介素13(IL-13)、白介素15(IL-15)、白介素16

3、(IL-16)和白介素18(IL-18)基因的序列，在保守區(qū)設計并合成各自特異引物，并以β-actin基因作為內參基因，采用SYBRGreenⅠ染料法，建立實時熒光定量PCR檢測方法。將基因克隆至pMD19-T載體上，以各陽性質粒作為標準品，構建標準曲線。結果如下：雞IFN-α、IFN-γ、IL-2、IL-6，IL-10、IL-13、IL-15、IL-16、IL-18和β-actin基因的Ct值與標準品稀釋度在2×104～2×108co

4、pies/μL范圍分別呈良好的線性關系，相關系數為0.997～1.000。熔解曲線分析表明，產物為特異的單峰，建立的雞IFN-α、IFN-γ、IL-2、IL-6、IL-10、IL-13、IL-15、IL-16和IL-18基因實時熒光定量PCR方法靈敏度高、特異性強、檢測周期短，為在mRNA水平對雞細胞因子的定量分析奠定了基礎。
　　 用建立的Real-time PCR方法檢測NDVF48E9、Lasota毒株感染后0、4、8、1

5、2、24、36小時雞胚成纖維細胞中IFN-α、IFN-γ、IL-2、IL-6、IL-10、IL-13、IL-15、IL-16和IL-18基因的差異表達情況如下：IL-15和IL-18在4小時、8小時、12小時、24小時F48E9感染組、Lasota感染組與對照組差異極顯著，表達量均顯著低矛對照組。而36小時F48E9感染組與對照組相比差異顯著，F48E9感染組細胞因子IL-15和IL-18表達量快速上升，高于對照組表達量；同時Lasot