不同毒力新城疫毒株誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡機(jī)制差異分析.pdf

1、溶瘤病毒是一類能特異在腫瘤細(xì)胞中復(fù)制并最終殺死腫瘤細(xì)胞的病毒。盡管新城疫病毒(New Castle Disease virus，NDV)是以禽類為天然宿主的病毒，但其已被多項(xiàng)研究證實(shí)是一種安全有效的溶瘤病毒，目前已有多種新城疫毒株用于臨床研究。研究表明凋亡可能作為新城疫病毒溶瘤機(jī)制之一在溶瘤過程起重要作用，但對不同NDV毒株在溶瘤治療機(jī)制方面研究不夠深入。本實(shí)驗(yàn)選取NDV-FMW、NDV-BC和NDV-LaSota分別作為強(qiáng)毒、中毒和弱

2、毒的代表毒株，以肺腺癌A549細(xì)胞為模型，研究了不同毒株在溶瘤效力、復(fù)制能力、凋亡誘導(dǎo)能力及機(jī)制等方面的差異。
　　 方法：1.MTT法篩檢測不同毒力毒株以不同濃度作用細(xì)胞24h、48h、72h后的溶瘤效率。2.Western Blot檢測病毒感染腫瘤細(xì)胞后凋亡途徑相關(guān)蛋白PARP、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Caspase-12及MAPK通路蛋白JNK、p38、ERK等的活化。
　　 結(jié)

3、果：本研究結(jié)果表明不同毒力毒株在溶瘤效力、復(fù)制能力、凋亡誘導(dǎo)能力及機(jī)制方面存在差異。 分別以不同MOI(0.1，1，10)病毒感染肺腺癌A549細(xì)胞，感染24h、48h、72h時(shí)以MTT法檢測細(xì)胞死亡率，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示溶瘤效率方面，強(qiáng)毒＞中毒＞弱毒，此外強(qiáng)毒和中毒溶瘤效率隨感染時(shí)間增加逐漸增強(qiáng)，而弱毒溶瘤效率隨感染時(shí)間變化不明顯，三種病毒溶瘤效率均與病毒使用劑量里正相關(guān)。病毒復(fù)制能力檢測結(jié)果表明，強(qiáng)毒與中毒在A549細(xì)胞中顯著增殖，但未檢

4、測到弱毒的增殖。對凋亡通路的研究結(jié)果表明，三種病毒分別感染細(xì)胞后均能同時(shí)活化Caspase8、Caspase9、Caspase3及裂解PARP蛋白，表明外源性及內(nèi)源性凋亡途徑同時(shí)參與病毒毒介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，而作為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑的標(biāo)志性蛋白，Caspase12的活化情況與對照無明顯變化。MAPK通路的主要蛋白磷酸化水平均有所升高，其中P-JNK磷酸化在病毒感染12h時(shí)有明顯升高，P38磷酸化水平與對照相比顯著升高，Erk1/2磷酸化水平除強(qiáng)