布魯氏菌強(qiáng)弱毒株誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡機(jī)制初步研究.pdf

1、目的:布魯氏菌病(Brucellosis)由是布魯氏菌屬(Brucella)成員引起的一種人畜共患傳染病,通常能夠長期持續(xù)的感染人畜,引起生殖器官損傷,一旦感染,難以治愈。布魯氏菌病在全世界廣泛存在爆發(fā)的情況下,給人類健康安全和農(nóng)牧業(yè)經(jīng)濟(jì)都造成了巨大的威脅和損失,而且還可被作為一種恐怖戰(zhàn)劑。布魯氏菌是胞內(nèi)寄生菌,革蘭氏陰性菌,主要以胚胎滋養(yǎng)層細(xì)胞核巨噬細(xì)胞為宿主細(xì)胞。布魯氏菌不產(chǎn)生外毒素,其毒力主要表現(xiàn)在侵襲力以及在宿主內(nèi)的生存和繁殖能

2、力。布魯氏菌抑制巨噬細(xì)胞凋亡是其能夠在宿主體內(nèi)生長繁殖而不被機(jī)體免疫系統(tǒng)識(shí)別清除的主要原因。因此,通過對(duì)布魯氏菌誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡的機(jī)制的研究是研究布魯氏菌病致病機(jī)制的基礎(chǔ)。
　　方法:(1)以布魯氏菌強(qiáng)毒株16M、疫苗株M5-90感染巨噬細(xì)胞RAW264.7模型,建立布魯氏菌株誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡機(jī)制提供最佳感染復(fù)數(shù)。
　　(2)布魯氏菌強(qiáng)毒株16M、疫苗株M5-90分別以最佳感染復(fù)數(shù)感染巨噬細(xì)胞RAW264.7,比較強(qiáng)弱毒株誘

3、導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡的差異。
　　(3)根據(jù)強(qiáng)弱毒株誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡的差異,選取促進(jìn)凋亡的菌株,探究caspase3、8、9在其誘導(dǎo)凋亡中的作用。
　　(4)檢測凋亡相關(guān)因子AIF、Bcl-2、Bax、Apaf-1、Bcl-xl分別在強(qiáng)弱毒株誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡中表達(dá)量的差異。
　　結(jié)果:(1)成功建立布魯氏菌誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡最佳感染復(fù)數(shù)50:1。
　　(2)早期感染階段,布魯氏菌疫苗株M5-90能促進(jìn)巨噬細(xì)胞凋亡。

4、>　　(3)Caspase3、9對(duì)布魯氏菌疫苗株M5-90誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡起到了促進(jìn)作用。
　　(4)ELISA結(jié)果顯示TNF-a和Cytc在疫苗株M5-90誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞凋亡中表達(dá)量上升,且高于強(qiáng)毒株16M誘導(dǎo)的。
　　實(shí)時(shí)定量PCR檢測結(jié)果顯示AIF的表達(dá)量呈上升趨勢,且疫苗株M5-90誘導(dǎo)的表達(dá)量高于16M的表達(dá)量;Bax/Bcl-2的比值,M5-90誘導(dǎo)的比大于16M;Apaf-1表達(dá)量沒有明顯變化趨勢,但是M5-9

5、0誘導(dǎo)的表達(dá)量始終高于16M;Bcl-xl的表達(dá)量隨著感染時(shí)間增加,表達(dá)量不斷增加,16M誘導(dǎo)的高于M5-90。激光共聚焦顯示Cytc定位顯示Cytc在巨噬細(xì)胞內(nèi)屬于包漿表達(dá),且M5-90誘導(dǎo)的表達(dá)量明顯高于16M,并隨感染時(shí)間的增長不斷增加。
　　結(jié)論:(1)以感染復(fù)數(shù)50:1感染巨噬細(xì)胞時(shí),感染早期階段,布魯氏菌疫苗株M5-90能促進(jìn)細(xì)胞凋亡。
　　(2)Caspase3、9在M5-90誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞凋亡中起到重要的促凋