REV感染對(duì)雞胚成纖維細(xì)胞凋亡及P53表達(dá)的影響.pdf

1、禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生病(reticuloendotheliosis，RE)是由禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生病病毒(reticuloendotheliosis virus，REV)引起的一種禽免疫抑制和腫瘤性疾病，REV主要引起病禽的免疫抑制、網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞增生、淋巴瘤的生成等。細(xì)胞凋亡是一種程序性細(xì)胞死亡過(guò)程，對(duì)內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)的維持起重要作用。p53基因不但與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，也與細(xì)胞凋亡的產(chǎn)生密切相關(guān)。目前，對(duì)于RE的流行病學(xué)、病原學(xué)、特異性診斷、尤

2、其是病原的分子生物學(xué)特性等進(jìn)行較系統(tǒng)的研究，并且取得一定的成果，但是對(duì)于REV引起病禽免疫抑制癥狀、特別是REV的免疫致病機(jī)制依然缺乏全面深入的了解。為從細(xì)胞凋亡角度闡述REV引起免疫抑制的機(jī)制，探究細(xì)胞凋亡與REV致病的關(guān)系，本項(xiàng)研究以SPF雞胚成纖維細(xì)胞(CEF)為研究對(duì)象，實(shí)驗(yàn)分為空白對(duì)照組（C組）和REV感染組（I組），其中，REV感染組運(yùn)用100TCID50濃度的病毒感作雞胚成纖維細(xì)胞2h，棄掉感作液后補(bǔ)加含有2％胎牛血清的D

3、MEM維持細(xì)胞生長(zhǎng)，而空白對(duì)照組用不含病毒的DMEM作用2h后，棄掉DMEM后補(bǔ)加含有2％胎牛血清的DMEM維持細(xì)胞生長(zhǎng)，在成功制備兔抗雞P53多克隆抗體的基礎(chǔ)上，分別應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)、實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RT-PCR）、Western Blot等方法，通過(guò)對(duì)C組和I組雞胚成纖維細(xì)胞凋亡數(shù)量、p53 mRNA表達(dá)及P53蛋白表達(dá)量變化的檢測(cè)，較全面系統(tǒng)的研究了REV感染SPF雞胚成纖維細(xì)胞后，不同被檢時(shí)間點(diǎn)上述被檢指標(biāo)的動(dòng)態(tài)變化，為深入研

4、究REV引起細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制提供理論參考依據(jù);同時(shí)，也為從細(xì)胞凋亡角度研究REV引起免疫抑制的機(jī)制提供參考。主要研究結(jié)果如下:
　　1.成功制備了兔抗雞P53多克隆抗體，該抗體的ELISA效價(jià)為219，經(jīng)Western Blot檢測(cè)，其特異性強(qiáng)。
　　2.REV感染SPF雞胚成纖維細(xì)胞后72 h內(nèi)，其SPF雞胚成纖維細(xì)胞凋亡數(shù)量均比未感染RE病毒的對(duì)照雞胚不同程度升高，其中，病毒感作后72 h時(shí)，病毒感染組CEF與對(duì)照組C

5、EF差異顯著(P＜0.05)。
　　3.REV感染SPF雞胚成纖維細(xì)胞后6-72 h，與未感染REV的對(duì)照組相比較RE病毒感染組p53 mRNA表達(dá)量均不同程度升高，其中，病毒感染后48 h和72 h時(shí)，病毒感染組p53mRNA表達(dá)較對(duì)照組明顯增加(P＜0.05)。
　　4.REV感染SPF雞胚成纖維細(xì)胞后6-72 h，RE病毒感染組P53蛋白量均比對(duì)照組不同程度升高。
　　根據(jù)以上試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn):REV能夠引起SPF雞