硫酸鈹致人胚肺成纖維細(xì)胞凋亡線粒體途徑的作用機(jī)制.pdf

1、目的：
　　本研究觀察不同濃度硫酸鈹（BeSO4）對體外培養(yǎng)人胚肺成纖維細(xì)胞（MRC-5）早期凋亡率、線粒體膜電位的影響，凋亡誘導(dǎo)因子（AIF）、凋亡蛋白酶激活因子（Apaf-1）mRNA以及蛋白表達(dá)的改變，研究線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔（mPTP）在BeSO4致體外培養(yǎng)MRC-5細(xì)胞凋亡中的作用，并觀察mPTP開放抑制劑環(huán)孢霉素A（CsA）與促開放劑蒼術(shù)苷（ATR）對此作用的干預(yù)。
　　方法：
　　體外培養(yǎng)MRC-5細(xì)胞系，

2、采用CCK-8法確定CsA和ATR干預(yù)劑量；試驗(yàn)分空白對照組、BeSO4染毒組（劑量分別為1、10、100μmol/L）、干預(yù)組（10μmol/L BeSO4+10μmol/L CsA和10μmol/L BeSO4+10μmol/L ATR）、干預(yù)對照組（10μmol/L CsA和10μmol/L ATR）；分別染毒及干預(yù)24h、48h、72h后，收集細(xì)胞進(jìn)行試驗(yàn)，流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞早期凋亡率，JC-1熒光探針標(biāo)記檢測線粒體膜電位的改變

3、，實(shí)時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（qRT-PCR）檢測AIF、Apaf-1 mRNA表達(dá)，蛋白免疫印記法（Western Blot）檢測各劑量組AIF、Apaf-1蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1.染毒24h、48h、72h，CCK-8法確定CsA和ATR干預(yù)劑量均為10μmol/L。
　　2.BeSO4低、中、高劑量組分別染毒24h、48h、72h，MRC-5細(xì)胞早期凋亡率出現(xiàn)不同程度降低，染毒72h，BeSO

4、4低、中、高劑量染毒組與同時相空白對照組相比降低（P<0.05），CsA干預(yù)組與同時相空白對照組相比降低（P<0.05），ATR干預(yù)組與同時相空白對照組相比差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），與BeSO4中劑量組相比增高但無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。
　　3.BeSO4低、中、高劑量分別染毒48h、72h，線粒體膜電位出現(xiàn)不同程度的增高，染毒48h，BeSO4高劑量組與同時相空白對照組及BeSO4中劑量組相比增高（P<0.05）

5、，染毒72h，BeSO4中劑量組與同時相空白對照組相比增高（P<0.05）；在72h時間點(diǎn)，CsA、ATR干預(yù)后與同時相BeSO4中劑量組相比線粒體膜電位降低（P<0.05），CsA、ATR對照組與同時相BeSO4中劑量組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　4.BeSO4低、中、高劑量分別染毒24h、48h、72h，三個劑量組AIF mRNA表達(dá)與同時相空白對照組相比降低（P<0.05）；在24h、48h、72h時間點(diǎn)，C

6、sA干預(yù)組與同時相空白對照組相比降低（P<0.05），但與同時相BeSO4中劑量組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；在24h、72h時間點(diǎn)，ATR干預(yù)組與同時相BeSO4中劑量組相比增高（P<0.05）。
　　5.BeSO4低、中、高劑量分別染毒24h、48h、72h，三個劑量組Apaf-1 mRNA表達(dá)與同時相空白對照組相比降低（P<0.05）；在24h、72h時間點(diǎn)，CsA干預(yù)組與同時相空白對照組相比降低（P<0.05），

7、CsA干預(yù)組與同時相BeSO4中劑量組相比降低（P<0.05）；在24h、48h、72h時間點(diǎn)，ATR干預(yù)組與同時相空白對照組相比差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），在24h、48h時間點(diǎn)，與同時相BeSO4中劑量組相比增高（P>0.05）。
　　6.染毒48h、72h，BeSO4中、高劑量組與同時相空白對照組相比AIF蛋白表達(dá)降低（P<0.05）；在72h時間點(diǎn)，CsA干預(yù)組與同時相空白對照組相比降低（P<0.05），與同時相

8、BeSO4中劑量組相比降低（P>0.05），ATR干預(yù)組與同時相BeSO4中劑量組相比增高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　7.染毒24h、48h，BeSO4中、高劑量組與同時相空白對照組相比Apaf-1蛋白表達(dá)降低（P<0.05）；在24h時間點(diǎn)，CsA干預(yù)組與同時相空白對照組相比降低（P<0.05），ATR干預(yù)組與同時相BeSO4中劑量組相比增高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　Be