葛根素對肺成纖維細胞增殖、凋亡及細胞外基質(zhì)的影響和可能作用機制.pdf

1、目的：觀察葛根素對體外培養(yǎng)經(jīng)轉化生長因子(Transforming growth factor，TGF)-β1刺激后的人胚肺成纖維細胞（human embryo lung fibroblasts，HELF）增殖活性、凋亡演變和對細胞外基質(zhì)功能的影響，以及可能作用機制，為特發(fā)性肺纖維化(Idiopathic pulmonary fibrosis，IPF)的中西醫(yī)治療提供理論依據(jù)。
　　 方法：用0～200μg/ml濃度的葛根素分別

2、作用于經(jīng)TGF-β1因子刺激和未刺激的人胚肺成纖維細胞，24h后流式細胞儀測定在不同濃度葛根素培養(yǎng)下肺成纖維細胞的凋亡過程演變，CCK-8法測定增殖活性，Real Time PCR法檢測膠原-Ⅰ(collagen-Ⅰ)、結締組織生長因子(connective tissue growth factor，CTGF)mRNA表達水平，Western blot法檢測膠原-Ⅰ、α-SMA(α-smooth muscle actin，α-平滑肌肌動

3、蛋白)及CTGF蛋白表達水平的變化。
　　 結果：流式細胞儀測定顯示一定濃度的葛根素(≥100μg/ml)在24h的干預下可以誘導TGF-β1因子刺激后的肺成纖維細胞的凋亡(P＜0.01)，并呈劑量依賴關系；CCK-8法結果顯示100～200μg/ml濃度的葛根素呈劑量依賴性地抑制肺成纖維細胞及TGF-β1因子刺激后肺成細胞的增生(P＜0.01);RealTimePCR法結果顯示葛根素呈劑量依賴性抑制TGF-β1刺激后肺成纖維細

4、胞中CTGF和collagen-Ⅰ的mRNA表達水平(P＜0.01=;Westernblot法結果顯示肺成纖維細胞經(jīng)5ng/mlTGF-β1刺激24h后，α-SMA顯著增加(P＜0.05)，葛根素呈劑量依賴性的下調(diào)了TGF-β1刺激后肺成纖維細胞中CTGF和collagen-Ⅰ的蛋白表達(P＜0.01)。
　　 結論：葛根素可抑制肺成纖維細胞的增殖，誘導其凋亡，可能通過下調(diào)CTGF的表達來影響肺成纖維細胞的細胞外基質(zhì)膠原-Ⅰ合成