PPARγ激動劑對TGF-β1誘導皮膚成纖維細胞外基質(zhì)的影響及其機制研究.pdf

1、【研究背景】
　　細胞和分子生物學研究表明，細胞外基質(zhì)（ECM）過度沉積和降解減少是增生性瘢痕（HS）形成的主要原因。已證實許多細胞因子參與瘢痕形成，而轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)被認為是與瘢痕形成關(guān)系最密切的細胞因子，它可誘導HS中兩個重要的病理改變：
　?。?）Ⅰ型膠原的過量合成、異常沉積；
　　（2）成纖維細胞（Fb）轉(zhuǎn)分化為肌成纖維細胞（MFb）。
　　最新研究表明，臨床上用于治療糖尿病的胰島素增敏劑

2、過氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPARγ)激動劑具有拮抗TGF-β1的上述效應(yīng)。目前，此類研究集中于抗內(nèi)臟器官的纖維化，有關(guān)PPARγ激動劑抗皮膚瘢痕的研究尚未見相關(guān)文獻報道。
　　【研究目的】
　　1.明確PPARγ激動劑干預(yù)對TGF-β1誘導皮膚Fb瘢痕化的抑制效應(yīng)，證實PPARγ拮抗皮膚瘢痕增生的細胞內(nèi)源性保護作用，為進一步探索臨床應(yīng)用PPARγ激動劑治療增生性瘢痕提供理論依據(jù)。
　　2.初步闡明激活后的PPAR

3、γ拮抗TGF-β1促纖維化的效應(yīng)機制，并以TGF-β1促纖維化的下游分子CTGF為研究重點，探討PPARγ對CTGF的作用影響。
　　【研究內(nèi)容】
　　1.PPARγ激動劑對TGF-β1誘導正常皮膚Fb細胞外基質(zhì)表達的影響：分別采用免疫組化、化學試劑盒、Western blot等方法檢測Ⅰ型膠原、FN、羥脯氨酸含量變化，對ECM的水平進行定性、定量分析；
　　2.PPARγ激動劑對TGF-β1誘導正常皮膚Fb轉(zhuǎn)分化的影

4、響：采用免疫組化法、Western blot、實時熒光RT-PCR技術(shù)檢測PPARγ激動劑干預(yù)前后α-SMA水平變化；
　　3.激活后的PPARγ拮抗TGF-β1誘導皮膚Fb瘢痕化效應(yīng)機制研究：選取與瘢痕形成密切相關(guān)的細胞因子CTGF、MMP-1、TIMP-1及PDGF為研究對象，觀察PPARγ激動劑對其表達的影響，重點檢測CTGF在mRNA、蛋白水平的表達變化；
　　4.檢測、比較增生性瘢痕、瘢痕疙瘩組織與正常皮膚中PPA

5、Rγ、CTGF及TGF-β1的基因水平差異。
　　【研究結(jié)果】
　　1.TGF-β1能顯著增加人正常皮膚FbⅠ型膠原和FN表達，并呈劑量依賴效應(yīng)；與TGF-β1誘導組相比，PPARγ激動劑曲格列酮和15d-PGJ2（濃度均為10μM）預(yù)處理組Ⅰ型膠原和FN表達顯著減少(P＜0.01)；
　　2.TGF-β1能顯著增加人正常皮膚Fb轉(zhuǎn)分化為MFb，而經(jīng)PPARγ激動劑曲格列酮和15d-PGJ2（濃度均為10μM）分別預(yù)處

6、理后α-SMA表達量顯著減少(P＜0.01)，顯示Fb的轉(zhuǎn)分化明顯下降；
　　3.TGF-β1誘導后，正常皮膚Fb的結(jié)締組織生長因子（CTGF）在蛋白表達和mRNA水平上均明顯升高（P＜0.01），而經(jīng)PPARγ激動劑預(yù)處理后CTGF的蛋白表達和mRNA水平顯著降低（P＜0.01）；
　　4.通過實時熒光RT-PCR技術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)，與成人正常皮膚相比燒傷后增生性瘢痕和瘢痕疙瘩組織中PPARγmRNA水平明顯下降（P＜0.05）

7、，CTGF、TGF-β1mRNA水平明顯升高（P＜0.01）。
　　【研究結(jié)論】
　　1.PPARγ激動劑可抑制TGF-β1誘導的人正常皮膚FbECM合成增多的效應(yīng)，具有體外抗瘢痕纖維化的作用；
　　2.PPARγ激動劑能抑制TGF-β1誘導的人正常皮膚Fb轉(zhuǎn)分化為MFb，提示激活的PPARγ有抗瘢痕纖維化、攣縮的潛在作用；
　　3.激活的PPARγ可拮抗由TGF-β1誘導的FbCTGF合成增加效應(yīng)，該作用可能是