PPARα激動(dòng)劑非諾貝特抑制高糖誘導(dǎo)的腎小球系膜細(xì)胞增殖及細(xì)胞外基質(zhì)產(chǎn)生的機(jī)制探討.pdf

1、目的：觀察過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體α(peroxisome proliferator activated receptors α，PPARα)激動(dòng)劑非諾貝特對(duì)高糖誘導(dǎo)的腎小球系膜細(xì)胞增殖及細(xì)胞外基質(zhì)（Extracellular matrix，ECM）蛋白產(chǎn)生的影響，初步探討其對(duì)糖尿病腎病的保護(hù)作用及可能的分子機(jī)制。
　　 方法：體外高糖培養(yǎng)大鼠腎小球系膜細(xì)胞（mesangial cells，MCs），將MCs分為正常對(duì)照組（N

2、,5mmol/L葡萄糖）、高糖組（H,40mmom/L葡萄糖）、高糖+不同濃度的PPARα激動(dòng)劑非諾貝特組（FN）、高糖+不同濃度PPARα抑制劑MK886組（MK），通過(guò)轉(zhuǎn)染含PPAR反應(yīng)元件（PPARresponse element PPRE）的p4XPPRE-luc重組質(zhì)粒，雙熒光素酶分析法檢測(cè)細(xì)胞PPARα活性的改變；RT-PCR及Western blot檢測(cè)PPARαmRNA及蛋白的表達(dá)情況；MTT法及流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞增殖及

3、細(xì)胞周期；采用RT-PCR檢測(cè)端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶（telomerase reverse transcriptase，TERT）的表達(dá)；結(jié)合RT-PCR、Westernblot及免疫熒光法檢測(cè)纖維連接蛋白mRNA（fibronectin mRNA）、α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（alpha-smooth muscle actin，α-SMA）、IV型膠原（Collagen-IV，Col-IV）蛋白的表達(dá)及胞內(nèi)信號(hào)蛋白P-AKT及P-ERK1/2的表達(dá)情

4、況。
　　 結(jié)果：與N組比較，H組PPARα活性改變無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而合適濃度的非諾貝特干預(yù)后PPARα受體活性明顯增加，MK組的活性下降。H組MCs PPARαmRNA及蛋白表達(dá)均上調(diào)；與H組相比，F(xiàn)N各組上述表達(dá)水平顯著升高，呈濃度依耐性；MK組則表達(dá)下調(diào)，其作用在干預(yù)6h較顯著。與N組相比較，H組細(xì)胞增殖明顯增加；與H組比較，F(xiàn)N組細(xì)胞增殖被抑制，呈濃度依賴性。與N組相比，H組細(xì)胞G2/M及S期比例增加；與H組比較，F(xiàn)N組G

5、0/G1期比例增加，S期及G2/M期逐漸減少，MK組S期及G2/M比例則漸增。H組Fibronectin mRNA、α-SMA及Collagen-IV蛋白表達(dá)增加，F(xiàn)N組則明顯下調(diào)。H組P-AKT、P-ERK1/2表達(dá)增加，F(xiàn)N組其表達(dá)明顯下調(diào)。
　　 結(jié)論：非諾貝特可通過(guò)抑制高糖誘導(dǎo)的腎小球系膜細(xì)胞增殖及細(xì)胞外基質(zhì)蛋白的表達(dá)可能對(duì)糖尿病腎病起保護(hù)作用，其作用機(jī)制可能與PPARα激活后作用于PI3K-AKT及ERK1/2胞內(nèi)信號(hào)