PPARγ1對(duì)系膜細(xì)胞外基質(zhì)生成的抑制作用及其機(jī)制.pdf

1、第一部分,表達(dá)PPARγ1全長(zhǎng)基因的質(zhì)粒構(gòu)建及在轉(zhuǎn)染的系膜細(xì)胞中的功能鑒定目的.過氧化物酶體增殖物激活受體γ(Peroxisome Proliferator- Activated Receptors γ, PPARγ1)屬于配體激活的核受體超家族成員之一.通常所說的 PPARγ就是 PPARγ1. PPARγ具有兩種配體,一種是天然性配體,如:游離脂肪酸及其代謝產(chǎn)物、15d-PGJ2;另一種是合成性藥物性配體,即噻唑烷二酮類藥物(TZD

2、s),與天然性配體相比較,TZDs類藥物具有親和性高、特異性強(qiáng)的特點(diǎn).既往研究認(rèn)為 PPARγ的作用與主要與脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)和代謝途徑有關(guān).近年來研究發(fā)現(xiàn) PPARγ與一些疾病如糖尿病、肥胖、動(dòng)脈粥樣硬化、高血壓及某些惡性腫瘤的發(fā)生也有密切的關(guān)系,而且其作用不局限于代謝效應(yīng),可能對(duì)炎癥、增殖、硬化等的發(fā)生發(fā)展具有直接的、非代謝性的對(duì)抗效應(yīng).國(guó)外大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為TZDs類藥物是通過 PPARγ的激活而產(chǎn)生相應(yīng)的作用,但是有少數(shù)研究結(jié)果指出以往認(rèn)為的

3、 PPARγ的作用可能只是TZDs類藥物的自身作用而非 PPARγ1的直接作用,而目前絕大多數(shù)的研究仍然用的是TZDs類藥物.為了明確這個(gè)疑問,我們構(gòu)建了 PPARγ1全長(zhǎng)表達(dá)基因的質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染系膜細(xì)胞鑒定質(zhì)粒的功能,為進(jìn)一步探討 PPARγ1在腎臟的作用機(jī)制提供有利的工具. PPARγ1全長(zhǎng)表達(dá)基因質(zhì)粒的構(gòu)建為探討 PPARγ1的機(jī)制提供了有利的工作.第二部分, PPARγ1過表達(dá)抑制高糖誘導(dǎo)的系膜細(xì)胞外基質(zhì)的產(chǎn)生.PPARγ1的外源性

4、配體噻唑烷二酮類化合物(thiazolidinediones, TZDs)類藥物目前已作為胰島素增敏劑而廣泛應(yīng)用于臨床糖尿病的治療.近年來一些動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床研究顯示,TZDs在不同的疾病狀態(tài)下具有一定的腎臟保護(hù)作用,諸如糖尿病、高血壓、腎大部切除大鼠模型和腎炎大鼠模型等,但其具體機(jī)制不清楚.基于上述,我們應(yīng)用基因轉(zhuǎn)染技術(shù)將 PPARγ1的全長(zhǎng)表達(dá)基因轉(zhuǎn)入大鼠系膜細(xì)胞,排除體內(nèi)各種干擾因素,探討 PPARγ1對(duì)高糖誘導(dǎo)的系膜細(xì)胞外基質(zhì)的非

5、代謝性作用.在不影響糖代謝的情況下, PPARγ1通過抑制ERK/AP-1及NFκB等信號(hào)的傳遞,來抑制高糖刺激下的系膜細(xì)胞細(xì)胞外基質(zhì)的合成,增加細(xì)胞外基質(zhì)的降解,減少細(xì)胞外基質(zhì)的積聚,同時(shí)降低AT1的蛋白表達(dá).這為 PPARγ1具有直接抗硬化非代謝性效應(yīng)的推測(cè)提供了體外依據(jù).第三部分, PPARγ1過表達(dá)抑制血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的系膜細(xì)胞外基質(zhì)的產(chǎn)生.近年來研究發(fā)現(xiàn) PPARγ的配體在糖尿病腎病和非糖尿病腎病動(dòng)物模型中均有不依賴于降血壓、

6、降血糖或降血脂的腎臟保護(hù)作用,能顯著抑制各種損傷導(dǎo)致的腎小球硬化.在這些腎病模型中腎內(nèi)局部的RAS都受到了激活,并且作為局部RAS系統(tǒng)最主要的效應(yīng)物血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)能夠誘發(fā)或加重細(xì)胞外基質(zhì)在腎臟的積聚.我們應(yīng)用現(xiàn)代基因轉(zhuǎn)染技術(shù)將 PPARγ1的全長(zhǎng)表達(dá)基因轉(zhuǎn)入大鼠系膜細(xì)胞,替代目前存在較大爭(zhēng)議的藥物和天然配體干預(yù)方法,來探討 PPARγ1對(duì)血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的系膜細(xì)胞細(xì)胞外基質(zhì)的抑制作用. PPARγ1過表達(dá)能夠通過降低AT1受體