PPARγ配體對Raji細胞的生長抑制作用及其對Wnt信號通路的影響.pdf

1、過氧化物酶體增殖物活化受體γ(PPARγ)是一類由配體激活的轉(zhuǎn)錄因子，屬于Ⅱ型核激素受體超家族成員。激活的PPARγ與核內(nèi)的維甲酸X受體(RXR)結(jié)合形成異源二聚體，再與靶基因的啟動子中PPAR反應(yīng)元件(PPRE)相結(jié)合，調(diào)節(jié)靶基因的轉(zhuǎn)錄。最初對于PPARγ的研究僅限于它在糖、脂代謝、能量代謝及調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)等作用，而近年研究表明，在抑制腫瘤細胞生長和腫瘤相關(guān)血管形成、促進腫瘤細胞分化和凋亡、調(diào)節(jié)腫瘤相關(guān)免疫及侵襲性等方面，PPARγ信號

2、通路也具有較為重要的作用。
　　 Wnt信號通路在細胞的增殖分化過程中起重要的調(diào)節(jié)作用，是胚胎發(fā)育所必須的信號系統(tǒng)；該信號通路由Wnt蛋白及其下游的多種調(diào)節(jié)因子組成，Wnt蛋白的激活及異常表達可以促進腫瘤細胞的增殖，參與人類多種腫瘤的發(fā)生。β-catenin(β-連環(huán)蛋白)是一種重要的細胞核轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，在腫瘤的發(fā)生過程中，β-catenin可以通過進入細胞核內(nèi)與多種轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合，從而啟動轉(zhuǎn)錄過程，調(diào)控相應(yīng)靶基因表達，導(dǎo)致腫瘤細

3、胞進入細胞周期，促進腫瘤的發(fā)生發(fā)展。GSK-3β(糖原合酶激酶-3β)是一種多功能的絲氨酸/蘇氨酸激酶，GSK-3β可以通過能磷酸化多種與腫瘤細胞增殖相關(guān)的細胞因子如細胞周期素(如cyclinD1)、細胞凋亡調(diào)節(jié)基因(如C-myc、Jun)以及血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)等抑制腫瘤細胞的增殖。β-catenin是GSK-3β的重要作用底物之一，GSK-3β可以使腫瘤細胞內(nèi)的β-catenin磷酸化，導(dǎo)致其破壞或滅活，從而抑制腫瘤細胞

4、的增殖和腫瘤干細胞的自我更新。GSK-3β是Wnt信號通路下游的重要靶分子之一，Wnt激活后可以與其受體Frizzled結(jié)合從而抑制GSK-3β的活性，抑制GSK-3β對β-catenin的降解，導(dǎo)致非磷酸化的β-catenin過多積聚于胞漿并進一步轉(zhuǎn)移移位到胞核，與淋巴細胞增強因子/T細胞特性轉(zhuǎn)錄因子LEF/TEF(Lymphocyteenhancer factor/T cell specific transcription fact

5、or)結(jié)合，進而激活與腫瘤增殖密切相關(guān)的靶基因。因此，Wnt/GSK-3β/β-catenin信號通路與惡性腫瘤的增殖狀態(tài)密切相關(guān)。
　　 本研究的主要目的是：(1)研究PPARγ激動劑羅格列酮及拮抗劑GW9662對人淋巴瘤白血病Raji細胞的增殖、凋亡及細胞周期的影響；(2)檢測PPARγ配體RGZ和GW9662單獨及聯(lián)合應(yīng)用對Raji細胞的增殖抑制作用及對β-catenin及GSK-3β的影響，探討在體外實驗中，PPARγ配

6、體對Raji細胞的作用機制是否與Wnt/GSK-3β/β-catenin信號通路有關(guān)。
　　 本研究根據(jù)實驗?zāi)康脑O(shè)計不同濃度的單藥組、聯(lián)合用藥組及空白對照組，分別處理細胞，在不同的時間點，采用MTT比色法檢測各組細胞生長抑制率，發(fā)現(xiàn)40μmol/L以上RGZ組及10μmol/L GW9662組呈時間、劑量性抑制Raji細胞的生長，且聯(lián)合用藥組較RGZ單藥組更顯著的抑制細胞生長。通過運用瑞氏—姬姆薩染色法及流式細胞術(shù)分析各組細胞用

7、藥后的變化發(fā)現(xiàn)，單藥組和聯(lián)合用藥組可見細胞膜皺縮、染色質(zhì)濃縮、細胞核碎裂等凋亡形態(tài)學(xué)改變，且聯(lián)合用藥組可見更多的凋亡細胞，并呈現(xiàn)一定的時間—效應(yīng)及劑量—效應(yīng)。由此可見，PPARγ配體抑制Raji細胞生長與促進細胞凋亡相關(guān)。
　　 為了進一步研究PPARγ配體促進細胞凋亡是否與Wnt信號通路有關(guān)，運用熒光定量PCR法和western blot法檢測了對照組及各給藥組PPARγ、β-catenin、GSK-3β表達水平的變化。結(jié)果顯

8、示，10μmol/L GW9662組對PPARγ表達無影響，40μmol/L RGZ上調(diào)PPARγ及GSK-3β的表達，同時下調(diào)β-catenin表達；而聯(lián)合用藥組較單藥組能顯著上調(diào)PPARγ、β-catenin及GSK-3β的表達。
　　 綜上所述，一定濃度的PPARγ激動劑RGZ和拮抗劑GW9662均可以通過阻滯細胞周期及誘導(dǎo)細胞凋亡等作用發(fā)揮對Raji細胞的生長抑制作用，RGZ的機制可能是通過上調(diào)Raji細胞中GSK-3β