CTGF反義寡核苷酸對高糖培養(yǎng)人腎小球系膜細(xì)胞細(xì)胞外基質(zhì)表達(dá)的影響.pdf

1、前言: 糖尿病腎病是糖尿病最為嚴(yán)重的慢性并發(fā)癥之一，是終末期腎病最主要的原因，因此，糖尿病治療方略的發(fā)展是一個(gè)緊迫的問題，然而，至今還沒有一個(gè)清晰有效的方案被確立。許多因素與糖尿病的進(jìn)展有關(guān)，包括高血糖、高血壓、脂代謝紊亂、炎癥刺激和氧化應(yīng)激等。研究表明：糖尿病腎病與腎小球細(xì)胞外基質(zhì)的積聚導(dǎo)致的腎小球硬化有關(guān)，而高血糖是通過作用于細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)改變細(xì)胞的穩(wěn)定表型，促進(jìn)腎小球系膜細(xì)胞增生，足突細(xì)胞凋亡和細(xì)胞外基質(zhì)的增加，其中腎小球

2、系膜細(xì)胞的增生和細(xì)胞外基質(zhì)的積聚在糖尿病腎病的腎小球硬化中起關(guān)鍵作用。近期研究集中在高血糖的作用上，糖基化產(chǎn)物(Advanced glycosylation endproducts AGEs)已經(jīng)被確定在糖尿病腎病中起重要作用。研究表明轉(zhuǎn)化生長因子-β(transforming growth factor β TGF-β)和結(jié)締組織生長因子(Connective tissue growth factor CTGF)的誘導(dǎo)在糖尿病腎病的發(fā)

3、生發(fā)展中起重要作用。TGF-β作為最主要的致纖維化生長因子在腎小球硬化和間質(zhì)纖維化的作用已經(jīng)被證實(shí)。CTGF作為其下游效應(yīng)介質(zhì)也是一種促纖維化生長因子，在糖尿病腎病中起關(guān)鍵作用。CTGF屬于CCN家族，它在多種生理和病理過程(包括細(xì)胞增殖，移植，血管發(fā)生，細(xì)胞外基質(zhì)合成，細(xì)胞附著，細(xì)胞再生和凋亡)中起作用?；贑TGF促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)表達(dá)的作用，本研究的目的是觀察體外轉(zhuǎn)染CTGF反義寡核苷酸(antisense oligodeoxynuc

4、leotide ASODN)對高糖培養(yǎng)的人腎小球系膜細(xì)胞(human glomerular mesangial cells HGMC)細(xì)胞外基質(zhì)(Extracellular matrix ECM)表達(dá)的影響。探討CTGF ASODN在早期治療糖尿病腎病的意義。 材料與方法: 1、材料 腎小球系膜細(xì)胞4200購于美國sciencell公司，脂質(zhì)體Lipofectamine2000購于美國Invitrogen生命技術(shù)

5、有限公司，CTGF正義寡核苷酸(5’-ATG CTC GCC TCC GTC GCG-3’)及反義寡核苷酸(5’-CGC GAC GGA GGC GAG CTA)由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成，人纖維連接蛋白(Fibronectin FN)和層粘連蛋白(Laminin LN)酶聯(lián)免疫吸附劑試盒購于上海森雄公司。 2、方法 體外培養(yǎng)HGMC，取5-8代用于實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)分成六組1、正常糖組(5mmol/1)2、高糖組(

6、30mmool/1) 3、正常糖+甘露醇(25mmol/1)組4、高糖+CTGF反義寡核苷酸組5、高糖+CTGF正義寡核苷酸組6、高糖+單純脂質(zhì)體組。采用脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染寡核苷酸，在不同時(shí)間(0時(shí)、18時(shí)、24時(shí)、48時(shí)、72時(shí))收集各培養(yǎng)組培養(yǎng)液上清。用ELISA法檢測培養(yǎng)液上清中的纖連蛋白(fibronectin FN)和層粘連蛋白(laminin LN)含量。 結(jié)果: 1、高糖呈時(shí)間依賴促進(jìn)體外培養(yǎng)的HGMC分泌FN和

7、LN增加，而甘露醇無此作用； 2、轉(zhuǎn)染CTGF反義寡核苷酸可抑制高糖所致的FN和LN分泌增加。正義寡核苷酸和脂質(zhì)體無此作用。 結(jié)論: 高糖培養(yǎng)可促進(jìn)HGMC細(xì)胞外基質(zhì)FN和LN分泌增加，轉(zhuǎn)染C7GF ASODN可抑制上述高糖的作用，提示CTGF ASODN可通過抑制HGMC的CTGF表達(dá)水平而抑制細(xì)胞外基質(zhì)的合成與分泌，這可能成為防治糖尿病腎病(diabetic nephropathy DN)、特別是早期腎病的有