CTGF反義寡核苷酸對高糖培養(yǎng)人腎小球系膜細胞細胞外基質表達的影響.pdf

1、前言: 糖尿病腎病是糖尿病最為嚴重的慢性并發(fā)癥之一，是終末期腎病最主要的原因，因此，糖尿病治療方略的發(fā)展是一個緊迫的問題，然而，至今還沒有一個清晰有效的方案被確立。許多因素與糖尿病的進展有關，包括高血糖、高血壓、脂代謝紊亂、炎癥刺激和氧化應激等。研究表明：糖尿病腎病與腎小球細胞外基質的積聚導致的腎小球硬化有關，而高血糖是通過作用于細胞內信號傳導改變細胞的穩(wěn)定表型，促進腎小球系膜細胞增生，足突細胞凋亡和細胞外基質的增加，其中腎小球

2、系膜細胞的增生和細胞外基質的積聚在糖尿病腎病的腎小球硬化中起關鍵作用。近期研究集中在高血糖的作用上，糖基化產物(Advanced glycosylation endproducts AGEs)已經被確定在糖尿病腎病中起重要作用。研究表明轉化生長因子-β(transforming growth factor β TGF-β)和結締組織生長因子(Connective tissue growth factor CTGF)的誘導在糖尿病腎病的發(fā)

3、生發(fā)展中起重要作用。TGF-β作為最主要的致纖維化生長因子在腎小球硬化和間質纖維化的作用已經被證實。CTGF作為其下游效應介質也是一種促纖維化生長因子，在糖尿病腎病中起關鍵作用。CTGF屬于CCN家族，它在多種生理和病理過程(包括細胞增殖，移植，血管發(fā)生，細胞外基質合成，細胞附著，細胞再生和凋亡)中起作用。基于CTGF促進細胞外基質表達的作用，本研究的目的是觀察體外轉染CTGF反義寡核苷酸(antisense oligodeoxynuc

4、leotide ASODN)對高糖培養(yǎng)的人腎小球系膜細胞(human glomerular mesangial cells HGMC)細胞外基質(Extracellular matrix ECM)表達的影響。探討CTGF ASODN在早期治療糖尿病腎病的意義。 材料與方法: 1、材料 腎小球系膜細胞4200購于美國sciencell公司，脂質體Lipofectamine2000購于美國Invitrogen生命技術

5、有限公司，CTGF正義寡核苷酸(5’-ATG CTC GCC TCC GTC GCG-3’)及反義寡核苷酸(5’-CGC GAC GGA GGC GAG CTA)由上海生工生物工程技術服務有限公司合成，人纖維連接蛋白(Fibronectin FN)和層粘連蛋白(Laminin LN)酶聯(lián)免疫吸附劑試盒購于上海森雄公司。 2、方法 體外培養(yǎng)HGMC，取5-8代用于實驗。實驗分成六組1、正常糖組(5mmol/1)2、高糖組(

6、30mmool/1) 3、正常糖+甘露醇(25mmol/1)組4、高糖+CTGF反義寡核苷酸組5、高糖+CTGF正義寡核苷酸組6、高糖+單純脂質體組。采用脂質體法轉染寡核苷酸，在不同時間(0時、18時、24時、48時、72時)收集各培養(yǎng)組培養(yǎng)液上清。用ELISA法檢測培養(yǎng)液上清中的纖連蛋白(fibronectin FN)和層粘連蛋白(laminin LN)含量。 結果: 1、高糖呈時間依賴促進體外培養(yǎng)的HGMC分泌FN和

7、LN增加，而甘露醇無此作用； 2、轉染CTGF反義寡核苷酸可抑制高糖所致的FN和LN分泌增加。正義寡核苷酸和脂質體無此作用。 結論: 高糖培養(yǎng)可促進HGMC細胞外基質FN和LN分泌增加，轉染C7GF ASODN可抑制上述高糖的作用，提示CTGF ASODN可通過抑制HGMC的CTGF表達水平而抑制細胞外基質的合成與分泌，這可能成為防治糖尿病腎病(diabetic nephropathy DN)、特別是早期腎病的有