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1、中國疾病預(yù)防控制中心博士學(xué)位論文苯并(a)芘致人胚肺成纖維細(xì)胞周期動力學(xué)改變及其關(guān)卡阻滯機(jī)制研究姓名:嚴(yán)麗萍申請學(xué)位級別:博士專業(yè):勞動衛(wèi)生與環(huán)境衛(wèi)生學(xué)指導(dǎo)教師:陶茂萱20070701中國疾病預(yù)防控制中心博士學(xué)位論文2、體外培養(yǎng)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)是較好的研究化學(xué)物致癌機(jī)制的模型,本研究嘗試建立BaP惡性轉(zhuǎn)化的HELF細(xì)胞模型,研究細(xì)胞周期機(jī)制在腫瘤引發(fā)和形成過程中所起的作用。本研究以20~4001amol/LBaP多次處理HELF細(xì)胞,并
2、采取多項指標(biāo)對BaP轉(zhuǎn)化過程中的細(xì)胞進(jìn)行鑒定。3、以2、10和50lamoFLBaP對處于對數(shù)生長期的未同步化的HELF細(xì)胞作用4h,分析作用后不同時間細(xì)胞周期的分布,并分析BaP對腫瘤細(xì)胞系和永生化細(xì)胞系周期的影響。4、為避免占細(xì)胞比例較多的G1期細(xì)胞對其他時相細(xì)胞的反應(yīng)的掩蓋,本研究通過血清饑餓法和接觸抑制法同步化GO期細(xì)胞,分析血清再刺激或傳代后細(xì)胞周期的動態(tài)改變,獲得處于各時相的細(xì)胞;并以2、10和50lamol/LBaP針對同
3、步于各期的HELF細(xì)胞作用,分析周期分布的改變。從細(xì)胞周期調(diào)控蛋I蘭tcyclins、p53、p21、p16、Rb和E2F1蛋白表達(dá)改變的角度對細(xì)胞周期進(jìn)程調(diào)控機(jī)制和BaP致HELF細(xì)胞周期改變的機(jī)制進(jìn)行探討。研究結(jié)果1、低濃度(0~50lxmol/L)BaP(/一S9)短時間(4h)處理HELF細(xì)胞,能夠產(chǎn)生較低的細(xì)胞毒性和明顯的遺傳損傷效應(yīng)。經(jīng)過20h的修復(fù),未經(jīng)S9代謝活化的BaP對細(xì)胞產(chǎn)生的遺傳損傷基本恢復(fù),經(jīng)過S9代謝活化后產(chǎn)
4、生的遺傳損傷雖然修復(fù)明顯但仍然能被彗星實(shí)驗(yàn)靈敏地檢出。101xmol/L是BaP毒性最明顯的劑量。BaP致DNA損傷后細(xì)胞活性抑制最明顯的時間段為處理結(jié)束12h一24h,48h后細(xì)胞活性逐漸恢復(fù)。2、BaP處理后,細(xì)胞出現(xiàn)了生長速度加快、生長時限延長(約10代,30天)、細(xì)胞核深染、轉(zhuǎn)化灶形成和四倍體核型等部分轉(zhuǎn)化細(xì)胞性狀,但細(xì)胞未能獲得錨著非依賴生長能力,端粒酶未激活,未能越過生長極限而獲得永生化。3、BaP處理后12h、24h和36
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