當(dāng)歸補(bǔ)血總苷抑制TGF-β1刺激的人胚肺成纖維細(xì)胞膠原表達(dá)及作用機(jī)制.pdf

1、目的:肺纖維化(PF)是由多種原因引起的肺間質(zhì)性疾病,包括肺泡損傷,肺成纖維細(xì)胞過度增殖,細(xì)胞外基質(zhì)異常沉積等病理過程。肺纖維化的確切發(fā)病機(jī)制尚不清楚,預(yù)后較差。當(dāng)歸補(bǔ)血湯由黃芪、當(dāng)歸以5:1的配伍組成。當(dāng)歸補(bǔ)血總苷(TGDGBX)為其主要有效成分。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn),對于實(shí)驗(yàn)性肺纖維化大鼠,TGDGBX具有良好的抗纖維化作用,不僅能夠明顯減輕肺泡炎癥,而且顯著減少肺組織細(xì)胞外基質(zhì)的沉積。本課題擬通過TGF-β1刺激人胚肺成纖維細(xì)胞-

2、I(HLF-I)來模仿肺纖維化進(jìn)程中肺成纖維細(xì)胞的病理狀態(tài)。然后給予TGDGBX作用于HLF-I,來觀察TGDGBX在體外是否同樣具有良好的抗纖維化作用?并進(jìn)一步研究TGDGBX在體外是通過何種機(jī)制來發(fā)揮對膠原的調(diào)控作用?進(jìn)而從細(xì)胞和分子水平上闡明TGDGBX發(fā)揮抗肺纖維化作用的部分機(jī)制。
　　方法:MTT法檢測不同濃度TGF-β1對HLF-I增殖的刺激作用,確定最佳的TGF-β1刺激濃度;MTT法檢測當(dāng)歸補(bǔ)血總苷對TGF-β1刺

3、激的HLF-I增殖作用的影響;比色法測定各組細(xì)胞上清液羥脯氨酸的含量;RT-PCR法檢測各組細(xì)胞COL-ImRNA,COL-IIImRNA,a-smamRNA的表達(dá)情況;ELIAS法檢測各組細(xì)胞上清夜MMP-2,MMP-9,TIMP-1的含量;RT-PCR法檢測各組細(xì)胞MMP-2mRNA, MMP-9mRNA,TIMP-1mRNA的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:TGF-β1在1ng/ml濃度時(shí),對HLF-I細(xì)胞具有明顯的增殖作用。TGDG

4、BX在0.03,0.09和0.27(mg/ml)濃度時(shí)可以顯著抑制肺成纖維細(xì)胞的增值。與TGF-β1刺激組相比, TGDGBX0.03,0.09和0.27(mg/ml)濃度作用后,明顯降低HLF-I細(xì)胞上清液的HYP含量,并顯著抑制各組細(xì)胞的COL-ImRNA,COL-IIImRNA,a-smamRNA表達(dá)水平。與TGF-β1刺激組相比,TGDGBX0.03,0.09和0.27(mg/ml)濃度作用后,可以顯著降低各組細(xì)胞上清液中MMP

5、-2,MMP-9的含量,提高TIMP-1的含量。并且TGDGBX在0.09和0.27(mg/ml)濃度時(shí)明顯抑制MMP-9mRNA的表達(dá),TGDGBX在0.03,0.09和0.27(mg/ml)濃度時(shí)顯著抑制MMP-2mRNA的表達(dá),增加TIMP-1mRNA的表達(dá)。
　　結(jié)論:TGF-β1在1ng/ml的濃度顯著刺激HLF-I細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)型,可以用來模擬體外肺纖維模型中肺成纖維細(xì)胞的病理狀態(tài)。TGDGBX在體外通過抑制HLF-I細(xì)