從種蛋中分離的新城疫病毒抗原性及其F和HN基因的分析.pdf

1、雞新城疫(Newcastle Disease，ND)是由屬禽副粘病毒I型的新城疫病毒(Newcastle Disease Virus，NDV)引起的一種急性，烈性禽類傳染性疾病。未經(jīng)免疫的雞群，傳播性極強，發(fā)病和死亡率都非常高。而盡管我國各地都對ND采取了高強度的免疫程序，但近年來，隨著我國密集養(yǎng)禽地區(qū)的增多，新城疫流行仍很嚴重，成為最難以防治的疾病之一。特別是在1996年以來，不少地區(qū)的一些幾日齡的雛雞群中發(fā)現(xiàn)類似新城疫的臨床癥狀和病

2、理剖檢變化，同時，在種雞群中發(fā)生非典型新城疫以及由NDV感染引起的產(chǎn)蛋下降也相當(dāng)普遍。 針對一些幾日齡的雛雞群中可發(fā)現(xiàn)類似于ND的臨床表現(xiàn)和病理變化，我們懷疑為先天性感染。同時，針對高抗體水平、有產(chǎn)蛋下降癥狀的病雞進行不同器官的NDV分離時，首次分離出病毒的器官通常不是腦、脾臟，而是輸卵管，因此我們懷疑是否存在這樣一種毒株，它對輸卵管或卵細胞等存在一定的組織嗜性，在基因和抗原性上與目前流行的野毒存在著一定的差異。本實驗室于200

3、6～2007年自產(chǎn)蛋下降的肉用型父母代種雞群的種蛋分離得到3株NDV，還同時從肉種雞輸卵管分離到了另1株NDV。本文分別對這四株病毒的抗原性及F和HN基因進行比較分析，以闡述這些毒株與其他毒株差異性。 一、病毒的分離鑒定 通過本實驗室保存的已知的抗NDV、禽流感(H5和H9型)等單因子陽性血清作血凝抑制試驗(HI)證明均為NDV，同時對其中的3株病毒在細胞培養(yǎng)上完成了蝕斑純化。 二、交叉HI試驗檢測抗原性的差異

4、 以雞胚中分離到的三株純化后的克隆毒以及La sota株疫苗毒和F48E8株標(biāo)準(zhǔn)強毒為抗原制備單因子血清，按照常規(guī)HI方法將制備的5株NDV抗原和陽性血清進行交叉HI試驗，將5次HI的數(shù)據(jù)結(jié)果平均后，按免疫學(xué)方法計算HI相關(guān)指數(shù)。La Sota對傳統(tǒng)強毒F48E8的HI相關(guān)程度為0.866，而與從雞胚得到的分離株則相在0.821～0.829之間；三個分離株之間相關(guān)程度較高，TZ060107與SDCX07的HI相關(guān)系數(shù)為0.986，

5、TZ060107與SDMH07之間為1.00，而SDMH07與SDCX07之間的HI相關(guān)系數(shù)是0.981。這表明這幾個NDV野毒已在抗原性上發(fā)生了一定程度的變異。 三、F和HN基因的RT-PCR擴增及基因的分析 本試驗設(shè)計了兩對特異性引物，應(yīng)用RT-PCR技術(shù)擴增出NDV三個雞胚分離株F和HN基因全基因序列，并對其進行核苷酸序列測定和分析。結(jié)果表明：四個毒株的F基因ORF全長均為1662bp，編碼553個氨基酸，裂解位點

6、處氨基酸殘基序列為112R-R-Q-K-R-F117，是典型強毒株序列結(jié)構(gòu)；HN基因ORF全長均為1716bp，編碼571個氨基酸。 對F基因氨基酸同源性的比較結(jié)果表明：TZ060107，SDCX07，SDMH07，HNDY07之間同源性非常高為99.5～99.8％，而它們與La sota株的同源性僅為87.9～88.1％，與F48E8株的同源性為91.1～91.3％，與近年來流行的基因VII型毒株的同源性則為95.3～98.7

7、％。對HN基因比較的結(jié)果表明：TZ060107，SDCX07，SDMH07，HNDY07之間同源性為99.6～100.0％，與La sota株的同源性為88.1～88.4％，與F48E8株的同源性為89.7～90.0％，與近年來流行的基因VII型毒株的同源性則為90.7～99.1％。這說明當(dāng)前流行的野毒與傳統(tǒng)疫苗無論在F還是在HN基因上都發(fā)生了較大的變異。遺傳進化樹分析得出：該四個分離株為基因VII型，與當(dāng)前流行的其他基因VII型遺傳關(guān)