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文檔簡介
1、中國大陸于1994年在廣東省首次報道并分離得到H9N2亞型禽流感病毒,隨后該亞型病毒廣泛傳播至我國大部分省區(qū)。近年來,關(guān)于H9N2亞型禽流感病毒的分離報道呈持續(xù)上升態(tài)勢,該病的流行每年都給我國養(yǎng)禽業(yè)帶來巨大經(jīng)濟損失。同時H9N2亞型禽流感病毒還可以為新出現(xiàn)感染人的H7N9、H10N8亞型禽流感病毒提供內(nèi)部基因,潛在威脅人類健康安全,具有重要的經(jīng)濟和公共衛(wèi)生意義。
為弄清H9N2病毒在我國的流行變異情況,本研究對2012~201
2、5年分離到的42株H9N2亞型AIV進行全基因組測序和遺傳進化樹構(gòu)建,并選取其中的18株代表株制備單因子血清,進行交叉HI試驗,以此來研究H9N2流行株之間的抗原性分化情況,最后用免疫保護實驗,評價毒株Ck/GX/SIC6/13對流行株的免疫保護效果。
遺傳進化分析表明:42株H9N2病毒均屬于Ck/Bei-like分支(h9.4.2),其中97.6%(41/42)的分離株屬于h9.4.2.5亞分支,2.4%(1/42)的分離
3、株屬于h9.4.2.6亞分支,其HA基因之間的核苷酸相似性為86.7%~99.7%,與經(jīng)典疫苗株的相似性為88.6%~92.6%。分離株形成4種不同的重組基因型(S,U,V,W),基因型S是流行的主基因型,占研究毒株的92.8%(39/42);基因型V、W為新重組基因型,其中基因型V和基因型W分別整合了來源于G9-like譜系的NA基因和wild waterfowl-like譜系的PB2基因,使H9N2病毒的基因重組現(xiàn)象愈加復雜化。
4、r> 特定氨基酸位點分析表明:所有分離株的HA蛋白裂解位點有兩種模式,分別為PSRSSR↓GLF(97.6%,41/42)和PARSSR↓GLF(2.4%,1/42),沒有多個連續(xù)堿性氨基酸插入,均符合低致病性禽流感病毒的分子特征。部分毒株的HA受體結(jié)合位點模式與人流感病毒受體結(jié)合位點類似,92.8%(39/42)的毒株在HA蛋白上出現(xiàn)了與哺乳動物適應性相關(guān)的Q226→L突變;95.2%(40/42)的病毒在NA莖部出現(xiàn)了與毒力增強相
5、關(guān)的63-65位點三個氨基酸缺失;97.6%(41/42)的毒株M2蛋白發(fā)生了與金剛烷等藥物耐藥性相關(guān)的S31→N突變;本研究分離株中僅有2.4%(1/42)的毒株在PB2基因中出現(xiàn)E627→K,沒有D701→N突變出現(xiàn)。
交叉HI試驗結(jié)果表明:18株新分離株單因子抗血清對于相同和不同病毒抗原的HI效價差異為0~9 log2,它們之間的抗原相關(guān)性R值為0.41~1,說明即使來源同一分支的H9N2亞型AIV,其抗原性也正在逐漸分
6、化,抗原性差異各異的流行株同時存在給該病的防控帶來困難。本研究根據(jù)遺傳進化樹和交叉HI實驗結(jié)果,將18株新分離株分為3個抗原群(A、B、C),結(jié)合HA基因進化分支和毒株分離時間及地點等因素,3個抗原群的出現(xiàn)大致呈現(xiàn)出A→B→C的先后關(guān)系。
免疫保護實驗表明:H9N2早期分離株制備的滅活疫苗對現(xiàn)今H9N2流行毒株不能起到有效保護,對A群病毒的保護率僅為30%~50%;毒株Ck/GX/SIC6/13制備的滅活疫苗也只能保護本毒株的
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