AIV（H9N2）NS1蛋白單抗的研制及單抗介導(dǎo)ELISA對(duì)AIV（H9N2）HA抗原表位變異研究.pdf

1、禽流感病毒(AvianInfluenzaVirus，AIV)的非結(jié)構(gòu)蛋白(NS1)可作為一種區(qū)分野毒感染和滅活疫苗免疫雞群的鑒別診斷標(biāo)記，但不能區(qū)分AIV亞型，具有A型流感特異性。本文利用本河南農(nóng)業(yè)大學(xué)禽病研究所實(shí)驗(yàn)室已構(gòu)建的含有H9N2亞型AIVNS1蛋白基因的重組表達(dá)載體陽(yáng)性菌，在37℃條件下，用終濃度1mmol/L的IPTG誘導(dǎo)表達(dá)5h，經(jīng)15％的SDS-PAGE分析，表明NS1基因在大腸桿菌中得到高效表達(dá)。用HisTrapHPK

2、it進(jìn)行復(fù)性和純化，獲得了純度較高、生物活性較好的NS1蛋白。以此NS1蛋白作為抗原免疫Balb/c小鼠，應(yīng)用雜交瘤技術(shù)，通過(guò)ELISA篩選，建立了2株抗H9N2亞型AIVNS1單克隆抗體(MonoclonalAntibody，McAb，簡(jiǎn)稱單抗)雜交瘤細(xì)胞株6B9和6C2，其分泌單抗抗能力穩(wěn)定。將2株雜交瘤細(xì)胞株分別注射小鼠收獲的腹水單抗效價(jià)分別為100×212和100×210。制備的單抗有良好的熱穩(wěn)定性和較高的特異性，只與AIVNS

3、1蛋白反應(yīng)，而與H5N2亞型AIV、H9N2亞型AIV、NDV、IBV、IBDV、ILTV、EDS76V均不發(fā)生反應(yīng)。NS1蛋白單抗的成功研制為利用該單抗開發(fā)一種快速、特異、敏感的鑒別野毒感染禽群和疫苗免疫禽群的方法及進(jìn)一步研制診斷試紙條或組裝成試劑盒奠定了基礎(chǔ)，也為深入研究NS1蛋白的結(jié)構(gòu)和功能奠定了良好的基礎(chǔ)，對(duì)AI的早期診斷、適時(shí)監(jiān)控和凈化具有重要現(xiàn)實(shí)意義。 目前H9亞型AI仍是我國(guó)的流行主型，由于AIV抗原性和致病力的易

4、變異性及不同血清型毒株間缺乏交叉保護(hù)性，加大了AI防制的難度。本試驗(yàn)將本實(shí)驗(yàn)室已建立的4株抗H9N2亞型AIV血凝素(HA)單克隆抗體與保存的1998-2005年間的25株H9N2亞型AIV毒株進(jìn)行交叉ELISA試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)不同H9N2亞型AIV毒株血凝素(HA)抗原表位及毒力有明顯差異，可將25株H9N2型AIV毒株分為4類，進(jìn)一步證實(shí)了不同H9N2型AIV毒株HA抗原表位和毒力的變異性和多態(tài)性。其中2株毒株(A3和A18)比較特殊，與