血紅素加氧酶1對H9N2 AIV在雞輸卵管上皮細胞中增殖的調(diào)控作用.pdf

1、H9N2亞型禽流感為低致病性禽流感(Low Pathogenic Avian influenza，LPAI)，其傳染性較高、致死率較低，感染后可造成禽類的免疫力下降，呼吸道和生殖道系統(tǒng)的病變，蛋雞表現(xiàn)為產(chǎn)蛋率顯著下降，蛋的品質(zhì)下降，產(chǎn)薄殼蛋、軟殼蛋、砂皮蛋和畸形蛋，引發(fā)嚴重的經(jīng)濟損失。但目前尚未見關(guān)于H9N2亞型禽流感病毒感染如何導致雞輸卵管上皮細胞發(fā)生病變的分子機制研究的報道。血紅素加氧酶1(Heme Oxygenase-1，HO-1

2、)為機體內(nèi)重要的抗氧化應激蛋白酶，在抗炎、抗氧化、抗細胞凋亡、抗病毒感染中都有重要的作用。因此，本實驗分離培養(yǎng)了原代雞輸卵管上皮細胞(chicken oviduct epithelial cells，COEC)，研究了H9N2 AIV感染對細胞中HO-1表達的影響，并初步探索HO-1調(diào)控H9N2 AIV增殖的機制，主要研究結(jié)果如下:
　　1.H9N2 AIV在雞輸卵管上皮細胞中的增殖研究。
　　成功分離培養(yǎng)了雞輸卵管上皮細胞

3、，細胞表現(xiàn)為典型的上皮樣形態(tài)，生長狀態(tài)良好，角蛋白18鑒定呈陽性。H9N2 AIV感染第3代COEC，可觀察到細胞產(chǎn)生明顯的CPE，表現(xiàn)為細胞皺縮、拉長變細，部分細胞變圓，甚至裂解死亡。Western Blot可檢測到宿主細胞中有病毒NS1蛋白的表達。
　　2.H9N2 AIV感染COEC后細胞內(nèi)HO-1的表達變化。
　　H9N2 AIV感染COEC后，通過Real time PCR及Western Blot方法檢測不同時間

4、點HO-1的變化情況。結(jié)果表明，HO-1的mRNA和蛋白表達均水平顯著增加。
　　3.HO-1在H9N2 AIV的增殖過程中的作用研究。
　　為了研究HO-1在H9N2 AIV增殖過程中的作用，我們首先用HO-1的抑制劑ZnPP處理COEC，Western Blot檢測ZnPP抑制HO-1對H9N2 AIV增殖的影響。結(jié)果表明，ZnPP抑制了細胞中HO-1表達的同時，也顯著抑制H9N2 AIV的增殖水平。之后，我們將能特異性