山羊輸卵管上皮細胞核移植的研究.pdf

1、核移植技術對科學研究具有重要意義,近年來,體細胞的核移植技術發(fā)展迅速.該實驗用山羊的輸卵管上皮細胞進行核移植研究,建立了相應的核移植技術程序,如固定針和注射針的作用,卵母細胞的體外成熟培養(yǎng),成熟卵母細胞的去核,輸卵管上皮細胞輸入卵母細胞的卵周隙,去核卵母細胞-輸卵管上皮細胞復合體的電融合,重組胚的激活和培養(yǎng)等.該實驗的結論是:(1)卵母細胞體外成熟培養(yǎng)時,在培養(yǎng)液中添加發(fā)情羊血清(EGS)和雌二醇(17-β-E<,2>),可顯著提高卵母

2、細胞的成熟率.(2)在培養(yǎng)皿中用斜口拔尖的針對卵母細胞進行去核,并將輸卵管上皮細胞移入卵母細胞的卵周隙中,會節(jié)省體外操作的時間,有益于胚胎的發(fā)育.(3)直流脈沖電壓、脈沖寬度均影響融合率,對山羊去核卵母細胞-輸卵管上皮細胞復合體來說,當兩針電極相隔約3倍卵徑距離時,脈沖電壓為50V,脈沖寬度為50us,2次脈中,脈沖間隔為0.5s是一合適的電融合參數(shù).(4)重組胚用離子酶素和6-二甲氨基嘌呤先后進行激活處理,會顯著提高重組胚的卵裂率.(