H9N2 AIV影響小鼠NLRP3炎癥通路相關基因表達與分布的研究.pdf

1、H9N2亞型禽流感病毒可引起家禽的呼吸系統(tǒng)疾病，該病毒存在跨宿主傳播能力，并可與其它亞型的流感病毒重組形成新的流感病毒（如H7N9等），極大地威脅著人類的健康。炎癥反應在機體對抗流感病毒感染中發(fā)揮著重要的作用。其中，NLRP3炎性小體及其相關通路基因在機體識別以及清除病毒的內源性免疫進程中，扮演重要角色。NLRP3相關信號通路的激活以及誘導產生的細胞因子及趨化因子有助于機體抑制并清除流感病毒，誘導免疫細胞發(fā)揮作用對抗流感病毒的感染。但同

2、時，由此引發(fā)的“細胞因子風暴”，又是造成機體病理性損傷及病毒高致死率的主要原因。IFITMs作為干擾素誘導刺激基因之一，以其重要的抗病毒活性被廣泛研究。NLRP3炎性小體及其相關通路基因H9N2禽流感病毒感染中發(fā)揮怎樣的調控機制？IFITMs能否在機體內抑制H9N2禽流感病毒感染？H9N2亞型禽流感病毒PB2蛋白627位點的突變可否影響機體的內源性免疫反應？這些問題都亟待解決。因此，本研究以實驗室研究流感病毒常用的BALB/c小鼠為模型

3、，分別從機體內源性免疫的免疫調控機制及抗病毒機制這兩個不同方面，研究了野生型H9N2亞型禽流感病毒毒株（VK627）及其PB2蛋白627位點的單一突變株（rVK627E）感染對BALB/c小鼠機體內源性免疫的影響。研究內容如下：
　　1. H9N2亞型禽流感病毒感染及其PB2蛋白627位點對BALB/c小鼠致病性的影響
　　攻毒后分別記錄不同組BALB/c小鼠的體重變化情況和死亡率，并取感染小鼠的肺組織制作病理切片進行觀察。

4、結果顯示H9N2禽流感(VK627)毒株可感染BALB/c小鼠并引發(fā)相應的臨床癥狀，包括體重顯著下降，嚴重的間質性肺炎及細支氣管上皮細胞脫落和炎性滲出，并最終導致BALB/c小鼠死亡，具有高致死率。而PB2蛋白627位點單一突變可降低該毒株病毒毒力，感染小鼠不致死，相比與對照組，體重輕微下降，肺組織病變顯著輕微，且未見明顯炎性滲出物及脫落物。
　　2. H9N2流感病毒及其突變株感染對BALB/c小鼠肺NLRP3及其通路相關基因的

5、表達與蛋白組織分布的影響
　　分別采用熒光定量技術和免疫組化技術，檢測并比較對照組和攻毒組BALB/c小鼠肺組織內RIP3、NLRP3、IL-1β及TNF-α基因表達及蛋白分布的變化。結果顯示，VK627組肺組織RIP3、NLRP3、IL-1β、TNF-α基因與蛋白的表達量均顯著高于rVK627E組，說明H9N2亞型禽流感病毒VK627毒株及rVK627E毒株感染可不同程度地激活BALB/c小鼠的NLRP3及其通路相關基因，造成N

6、LRP3相關基因及其下游細胞因子表達量出現(xiàn)差異，這可能是造成BALB/c小鼠肺組織呈現(xiàn)不同程度病理損傷的潛在原因。
　　3. H9N2流感病毒及其突變株感染對BALB/c小鼠肺SLIT2/ROBO4基因表達及蛋白分布的影響
　　分別采用熒光定量技術和免疫組化技術，檢測并比較對照組和攻毒組BALB/c小鼠肺組織內SLIT2/ROBO4基因表達及蛋白分布的變化。結果顯示，SLIT2/ROBO4基因與蛋白表達在rVK627E毒株感

7、染組上調，而在VK627毒株感組則被持續(xù)抑制，可能是VK627毒株感染引起的間質性肺炎及細支氣管脫落及炎性滲出的程度強于rVK627E毒株的潛在原因之一，說明SLIT2/ROBO4在BALB/c小鼠機體對H9N2亞型禽流感病毒感染引發(fā)的病理損傷進程中，發(fā)揮潛在的抗炎功能。但其具體機制仍需進一步驗證。
　　4. H9N2流感病毒及其突變株感染對BALB/c小鼠各組織IFITM1/IFITM3表達譜的影響
　　分別采用熒光定量技

8、術和免疫組化技術，檢測并比較對照組和攻毒組BALB/c小鼠各組織內IFITM1/IFITM3基因表達及蛋白分布的變化。結果顯示，IFITM1/IFITM3基因與蛋白廣泛分布于BALB/c小鼠心臟、肝、脾、肺、腎、腦等多個組織器官之中。兩株H9N2禽流感病毒感染后，IFITM1/IFITM3基因與蛋白表達譜會發(fā)生相應的變化。證實IFITM1/IFITM3基因在BALB/c小鼠機體多組織器官發(fā)揮潛在的抗H9N2禽流感病毒感染的功能；同時，H

9、9N2禽流感病毒PB2蛋白627位點的突變會導致機體內源性免疫機制及抗病毒機制發(fā)生變化。
　　本研究初步探究了NLRP3炎性小體及其相關通路基因在H9N2流感病毒感染誘導的機體內源性免疫反應中的作用機制，證實H9N2禽流感病毒PB2蛋白627位點的突變會導致機體內源性免疫機制及抗病毒機制發(fā)生變化。同時，本研究首次探究了SLIT2/ROBO4在H9N2禽流感病毒感染引發(fā)的機體炎癥損傷中潛在的抗炎功能，并首次較全面闡釋了IFITM1/