芒柄花素通過NLRP3炎癥小體通路保護(hù)DSS誘導(dǎo)的小鼠急性結(jié)腸炎.pdf

1、炎癥性腸病(Inflammatory bowel disease，IBD)是一種病因尚不明確的反復(fù)發(fā)作的腸道非特異性炎癥性疾病，具有難治性及終身復(fù)發(fā)傾向，包括克羅恩病(Crohn's disease，CD)和潰瘍性結(jié)腸炎(Ulcerative colitis，UC)，近年來在全球范圍內(nèi)其發(fā)病率穩(wěn)步增長(zhǎng);在亞洲則呈迅速上升趨勢(shì)。
　　IBD的具體發(fā)病機(jī)制尚不明確，已明確的是腸道黏膜的免疫功能紊亂在IBD的發(fā)病過程中發(fā)揮重要作用，尋找

2、新型的免疫調(diào)節(jié)藥物一直是臨床防治IBD的重點(diǎn)。芒柄花素(Formononetin，F(xiàn)or)是一種植物異黃酮類化合物，也是一種生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑，既往研究提示芒柄花素具有調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝、抗炎、抗氧化、促凋亡、抗腫瘤活性等作用，其是否對(duì)小鼠急性結(jié)腸炎具有保護(hù)作用，尚無報(bào)道。本研究旨在明確For對(duì)葡聚糖硫酸鈉(DSS)誘導(dǎo)的小鼠急性結(jié)腸炎的保護(hù)作用，并闡述相關(guān)機(jī)制。
　　1.研究?jī)?nèi)容分為兩部分:
　　芒柄花素對(duì)DSS誘導(dǎo)的小鼠急性結(jié)腸炎

3、的保護(hù)作用
　　目的:
　　觀察芒柄花素對(duì)DSS誘導(dǎo)的小鼠急性結(jié)腸炎的保護(hù)作用。
　　方法:
　　1)2.5％DSS誘導(dǎo)小鼠急性結(jié)腸炎，采用不同劑量For(25g/kg、50g/kg、100g/kg)作用小鼠，觀察小鼠體重、DAI評(píng)分、病理?yè)p傷、結(jié)腸組織炎癥因子水平及結(jié)腸粘膜緊密連接蛋白ZO-1、claudin-1、occludin的蛋白表達(dá)等。
　　2)使用TNF-a孵育HCT116細(xì)胞建立體外腸黏膜上皮

4、細(xì)胞損傷模型，同時(shí)給予不同劑量For(25M、50M)干預(yù)。觀察細(xì)胞炎癥因子水平、緊密連接蛋白ZO-1、claudin-1、occludin蛋白表達(dá)等。
　　結(jié)果:
　　(1)2.5％DSS喂飼小鼠后可觀察到小鼠體重下降、便血及稀水便，并導(dǎo)致結(jié)腸損傷。For呈劑量依賴性保護(hù)DSS誘導(dǎo)的小鼠急性結(jié)腸炎。For可減少小鼠結(jié)腸炎臨床癥狀、結(jié)腸黏膜損傷、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，并下調(diào)了結(jié)腸組織炎癥因子(TNF-α、IL-1β)水平，上調(diào)了結(jié)腸

5、黏膜緊密連接蛋白ZO-1、claudin-1、occludin蛋白表達(dá)等。
　　(2)TNF-α可誘導(dǎo)HCT116細(xì)胞炎性損傷。而For呈劑量依賴性保護(hù)TNF-α誘導(dǎo)的體外結(jié)腸上皮細(xì)胞損傷。For可下調(diào)細(xì)胞IL-6、IL-1β表達(dá)，并上調(diào)細(xì)胞緊密連接蛋白(ZO-1、claudin-1、occludin蛋白表達(dá)等。
　　結(jié)論:
　　For可保護(hù)DSS誘導(dǎo)的小鼠急性結(jié)腸炎。
　　2.芒柄花素保護(hù)DSS誘導(dǎo)小鼠急性結(jié)腸

6、炎的分子機(jī)制
　　目的:明確芒柄花素保護(hù)DSS誘導(dǎo)的小鼠急性結(jié)腸炎的分子機(jī)制。
　　方法:
　　1)2.5％DSS誘導(dǎo)小鼠急性結(jié)腸炎，采用不同劑量For(25g/kg、50g/kg、100g/kg)作用小鼠，觀察小鼠腸道黏膜上皮細(xì)胞NLRP3通路NLRP3、ASC、IL-1β蛋白表達(dá)。
　　2)使用TNF-a孵育HCT116細(xì)胞建立體外腸黏膜上皮細(xì)胞損傷模型，同時(shí)給予不同劑量For(25M、50M)干預(yù)。觀察細(xì)胞

7、NLRP3、ASC、IL-1β mRNA及蛋白表達(dá)等。
　　3)最后應(yīng)用NLRP3特異性抑制劑MCC950明確For保護(hù)小鼠急性結(jié)腸炎的機(jī)制。使用MCC950和/或For(100mg/kg)作用于DSS誘導(dǎo)的小鼠急性結(jié)腸炎模型，分為DSS組，MCC950組（50mg/kg）、MCC950+For組（100mg/kg For+50mg/kg MCC950），觀察小鼠體重、DAI評(píng)分、病理?yè)p傷等。
　　結(jié)果:
　　1)體內(nèi)

8、實(shí)驗(yàn)中For呈劑量依賴性下調(diào)結(jié)腸組織NLRP3、ASC、IL-1β蛋白表達(dá);
　　2)體外實(shí)驗(yàn)中For可下調(diào)細(xì)胞NLRP3、ASC、IL-1β mRNA及蛋白表達(dá);
　　3)以DSS誘導(dǎo)的急性結(jié)腸炎小鼠為動(dòng)物模型，NLRP3特異性抑制劑MCC950可減輕小鼠急性結(jié)腸炎。但在應(yīng)用MCC950基礎(chǔ)上（MCC950組），未觀察到100mg/kg For（MCC950+For組）對(duì)小鼠急性結(jié)腸炎的保護(hù)作用。小鼠體重下降、臨床癥狀及結(jié)