中國2007年部分地區(qū)雞傳染性支氣管炎病毒分子流行病學(xué)研究.pdf

1、本研究于2007年從我國部分省市免疫雞群中分離到32株傳染性支氣管炎病毒(IBV)，對(duì)其生物學(xué)特性進(jìn)行了研究，同時(shí)對(duì)病毒S1基因序列進(jìn)行了測定、分析和比較。以說明我國IBV毒株之間以及與參考毒株之間S1基因的遺傳變異情況，同時(shí)構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹，分析我國IBV分離株與參考株之間的系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系，從而闡明我國IBV的基因型，探討我國雞傳染性支氣管炎流行的背景和原因。 現(xiàn)地瀕死病雞病變組織處理后，接種9-11日齡SPF雞胚，收集72h尿囊

2、液，同時(shí)觀察胚體病變。通過SPF雞胚病變特征、血紅細(xì)胞凝集特性、病毒粒子形態(tài)學(xué)特征等方面的研究，初步斷定本研究分離的病毒為雞傳染性支氣管炎病毒。 由于S蛋白在病毒致病性、免疫抗體產(chǎn)生和組織嗜性等方面占有核心地位，S1基因的點(diǎn)突變、缺失和插入是造成IBV基因組變異的主要原因，所以本研究根據(jù)S1基因核苷酸序列進(jìn)化關(guān)系將2007年32株IBV分離株與我國IBV分離株、我國常用疫苗株以及國外參考毒株分為3個(gè)基因型。其中第一個(gè)基因型為LX

3、4-type，包含了2007年從我國不同地區(qū)免疫雞群中分離的30株IBV，本實(shí)驗(yàn)所分離的絕大多數(shù)IBV毒株分布于該型，且親緣關(guān)系較近；第二個(gè)基因型為CK/CH/LSC/99Ⅰ-type，本研究中的分離株CK/CH/LDL/07Ⅲ屬于該基因型，其與該地區(qū)2004-2005年間IBV分離株的親緣關(guān)系比較近；第三個(gè)基因型為Mass-type，包括本研究中的分離株CK/CH/LHLJ/07Ⅶ，我國常用IBV疫苗株H120，IBN和W93和國外I

4、BV分離株(西班牙、美國、南朝鮮、日本等)。可見，2007年我國主要IBV分離株屬于獨(dú)立的基因型LX4-type，并且它們的親緣關(guān)系較近，而與我國目前用于IB預(yù)防的主要弱毒疫苗和國外參考毒株屬于不同的基因型。這可能是導(dǎo)致疫苗免疫失敗，IB在雞群中暴發(fā)的主要原因。因此迫切需要研制針對(duì)我國現(xiàn)地IBV流行毒株的疫苗。 根據(jù)本研究2007年32株IBV分離株與我國IBV分離株、我國常用疫苗株以及國外參考毒株的S1基因推導(dǎo)氨基酸序列比對(duì)、

5、分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同基因型/血清型IBV分別存在型特異性的氨基酸插入和缺失現(xiàn)象，其推導(dǎo)氨基酸的變異主要集中在72-79位、82-85位、127-130位。說明72-79位、82-85位、127-130位這三個(gè)區(qū)域氨基酸序列與IBV的基因型有關(guān)，可以作為IBV分型的標(biāo)準(zhǔn)。 經(jīng)S1基因系統(tǒng)進(jìn)化樹分析發(fā)現(xiàn)，本實(shí)驗(yàn)所分離的大多數(shù)IBV毒株(30/32)分布于同一基因型，因此對(duì)此基因型分離株CK/CH/LHLJ/07Ⅳ的致病性進(jìn)行了研究，該

6、病毒接種于42只和66只不同日齡的SPF雛雞和商品肉雞，死亡率為10.8％-30％。剖檢發(fā)現(xiàn)以腎臟腫大、蒼白、外觀呈現(xiàn)典型的“花斑腎”，腎小管和輸尿管擴(kuò)張并且有尿酸鹽沉積為主要病理變化。CK/CH/LHLJ/07Ⅳ的致病性試驗(yàn)結(jié)果表明歷經(jīng)十年來我國LX4型IBV分離株的致病力沒有發(fā)生明顯的變化，且仍以腎致病性為主。 雖然Mass型疫苗一直在我國廣泛使用，但Mass型IBV毒株CK/CH/LHLJ/07Ⅶ仍在免疫28/86和4/9

7、1的蛋雞群中分離到。于是，本研究將CK/CH/LHLJ/07Ⅶ分離株和12株Mass型參考毒株的S1基因核苷酸與推導(dǎo)氨基酸序列進(jìn)行了比較和同源性分析。結(jié)果表明，CK/CH/LHLJ/07Ⅶ與SD/97/01的S1基因核苷酸及推導(dǎo)氨基酸序列的同源性最高，分別為99％和97.1％。但通過S1基因核苷酸及推導(dǎo)氨基酸序列比對(duì)發(fā)現(xiàn)CK/CH/LHLJ/07ⅦS1基因核苷酸存在18個(gè)特異性位點(diǎn)的點(diǎn)突變和15個(gè)氨基酸的替換。這表明，在免疫雞群中很難重