elisa試驗(yàn)總論

1、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)及其應(yīng)用1一、 一、前 言近二十幾年來，免疫學(xué)分析方法發(fā)展很快，特別是在使用標(biāo)記了的抗原和抗體的分析技術(shù)以后，使原來許多經(jīng)典的分析方法在敏感性和特異性方面都不能相比。繼 50年代的免疫熒光（IFA）和 60 年代的放射免疫(RIA)分析技術(shù)之后，在 70 年代初期又建立了用酶來標(biāo)記抗原或抗體的分析技術(shù)。由于酶的高效生物催化作用，一個(gè)酶分子在數(shù)分鐘內(nèi)可以催化幾十幾百個(gè)底物分子發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生了放大作用，使得原來極其微乎其微

2、的抗原或抗體在數(shù)分鐘后就可被識(shí)別出來，這種技術(shù)被稱為酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法（Enzyme—Linked Immunosorbent Assay，ELISA），本法自 70 年代初期由 VAN WEEMEN、SCHUARS.ENGVALL 及 PERLMARN 等相繼分別報(bào)道后，現(xiàn)已引起廣泛重視。ELISA 法是免疫診斷中的一項(xiàng)新技術(shù)，現(xiàn)已成功地應(yīng)用于多種病原微生物所引起的傳染病、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫診斷。也已應(yīng)用于大分子抗原

3、和小分子抗原的定量測(cè)定，根據(jù)已經(jīng)使用的結(jié)果，認(rèn)為 ELISA 法具有靈敏、特異、簡(jiǎn)單、快速、穩(wěn)定及易于自動(dòng)化操作等特點(diǎn)。不僅適用于臨床標(biāo)本的檢查，而且由于一天之內(nèi)可以檢查幾百甚至上千份標(biāo)本,因此，也適合于血清流行病學(xué)調(diào)查。本法不僅可以用來測(cè)定抗體，而且也可用于測(cè)定體液中的循環(huán)抗原，所以也是一種早期診斷的良好方法。因此 ELISA 法在生物醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域的應(yīng)用范圍日益擴(kuò)大，可概括四個(gè)方面：1、免疫酶染色各種細(xì)胞內(nèi)成份的定位。2、研究抗酶抗體的

4、合成。3、顯現(xiàn)微量的免疫沉淀反應(yīng)。4、定量檢測(cè)體液中抗原或抗體成份。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)及其應(yīng)用3圖 1：竟?fàn)幏y(cè)抗原示意圖2、雙抗體夾心法 方法的基本原理可用圖 2 來表示圖 2.雙抗體夾心法測(cè)抗原示意圖本法首先也是用特異性抗體包被于固相載體，經(jīng)洗滌后加入含有抗原之待測(cè)樣品，如待檢樣品中有相應(yīng)抗原存在，即可與包被于固相載體上的特異性抗體結(jié)合，經(jīng)保溫孵育洗滌后，即可加入酶標(biāo)記特異性抗體，再經(jīng)孵育洗滌后，加底物顯色進(jìn)行測(cè)定，底物降解的量即為欲

5、測(cè)抗原的量。這種方法欲測(cè)的抗原必須有兩個(gè)可以與抗體結(jié)合的部位，因?yàn)槠湟欢艘挥诠滔噍d體上的抗體作用，而另一端則要與酶標(biāo)記特異性抗體作用。因此，不能用于分子量小于 5000 的半抗原之類的抗原測(cè)定。我們用在霍亂腸毒素的測(cè)定。HbSAg 及 HbS 的測(cè)定。3、改良雙抗體夾心法：本法是雙抗體夾心法的一種改良形式，也是用于測(cè)定抗原的，其原理可用圖 3 來表示。圖 3.改良雙抗體夾心法測(cè)抗原示意圖本法首先是將特異性抗體 a 包被于固相載體，經(jīng)

6、洗滌加入含有欲測(cè)抗原之待檢樣品。經(jīng)孵育洗滌后再加一次未標(biāo)記的特異性抗體 b，而這次加入的抗體 b 于第一次包被于固相載體上的特異性抗體 a 對(duì)被測(cè)抗原來說都是特異性的，但不是用同種動(dòng)物免疫制備的，否則可出現(xiàn)非特異性反應(yīng)。經(jīng)孵育洗滌后，再加酶標(biāo)記抗 b 抗體，再經(jīng)孵育洗滌后加底物顯色進(jìn)行測(cè)定。這種方法與雙抗體夾心法不同之處是多加了一層抗體。因此，放大的倍數(shù)更高，故比雙抗體夾心法更加靈敏。同時(shí)避免標(biāo)記特異性抗體，而另一優(yōu)點(diǎn)是只要標(biāo)記一種抗抗