堿性體系下高穩(wěn)纖維素酶的構(gòu)建.pdf

1、纖維素是儲量最多的可再生資源，充分地利用纖維素資源得到了普遍的關(guān)注。由于纖維素的自身高度結(jié)晶結(jié)構(gòu)嚴重阻礙了纖維素的利用，因此尋找有效溶解纖維素的綠色溶劑成為了關(guān)鍵。氫氧化鈉/尿素水溶液是目前公認的有效溶解纖維素的綠色溶劑。但是纖維素酶在堿性體系下，活性會降低，給降解纖維素帶來了許多困難。本課題采用大分子結(jié)合修飾的方法構(gòu)建在堿性體系下具有高穩(wěn)性的纖維素酶并對其動力學進行了測定，為纖維素的綜合利用提供了有利的參考。
　　本文主要采用分

2、子量為5000,10000,20000單甲氧基聚乙二醇馬來酰亞胺和分子量為5000的單甲氧基聚乙二醇琥珀酰亞胺對纖維素酶巰基和氨基進行化學修飾，制得了四種修飾纖維素酶。測定了修飾纖維素酶的平均巰基修飾度和氨基修飾度及在氫氧化鈉/尿素體系中的動力學參數(shù)。利用紅外光譜和原子力顯微鏡對修飾纖維素酶和天然纖維素酶進行了表征。
　　利用修飾纖維素酶和天然纖維素酶在同種體系下進行降解羧甲基纖維素，測定修飾纖維素酶活性。將修飾纖維素酶降解羧甲基

3、纖維素的反應液分別放置在0℃,-5℃,-10℃和-15℃進行纖維素酶的析出。并將析出的修飾纖維素酶通過兩種方法來測其酶活，一種是直接向反應液中加入羧甲基纖維素，另一種是將反應液倒出在加入羧甲基纖維素。
　　根據(jù)纖維素酶由三種單酶組成，分別降解了不同的底物：外切葡聚糖酶降解微晶纖維素、內(nèi)切葡聚糖酶降解羧甲基纖維素和纖維二糖酶降解纖維素二糖，以測其酶活，結(jié)果表明纖維二糖酶的活性為最高，纖維二糖酶對復合纖維素酶降解纖維素的影響最大。向復