纖維素酶降解殼聚糖的研究.pdf

1、近年來，低聚殼聚糖由于其功能的多樣性和獨(dú)特性，而廣泛受到關(guān)注。本論文主要對(duì)纖維素酶降解殼聚糖的水解條件及酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)進(jìn)行了研究，并用乙醇分布沉淀法獲得不同聚合度的低聚殼聚糖。
　　 通過研究纖維素酶降解殼聚糖各因素對(duì)酶反應(yīng)速度影響，得到以下結(jié)論:在pH5.0，60℃下酶促反應(yīng)速度最大；并且在反應(yīng)的前3.5h，反應(yīng)時(shí)間與酶反應(yīng)速度是線性增加的；當(dāng)?shù)孜餄舛纫欢ǎ笣舛仍?.05～0.3IU/mL范圍內(nèi)，酶促反應(yīng)速度隨酶濃度呈線性增

2、加。
　　 在低底物濃度下，纖維素酶降解殼聚糖符合米氏方程的規(guī)律，其米氏常數(shù)Km=9.34mg·mL-1，最大反應(yīng)速度Vm=7.96mg·L-1·min-1。此外，酶反應(yīng)速度還受殼聚糖脫乙酰度的影響。實(shí)驗(yàn)表明，在較高的脫乙酰度范圍(DD>80%)內(nèi)，酶反應(yīng)速度隨著脫乙酰度的升高而下降。
　　 通過對(duì)纖維素酶水解殼聚糖的條件研究，得出纖維素酶水解殼聚糖的最佳作用溫度是50℃，最適作用pH為5.0。用高效液相(HPLC)和質(zhì)

3、譜(MS)分析不同底物濃度水解液中各組分，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，3%殼聚糖水解液中2-5低聚糖比例為99.05%，確定了殼聚糖的最佳底物濃度為3%。通過研究水解率及還原糖變化，確定了最佳酶加入量是6IU/(g底物)；通過薄板層析(TLC)對(duì)不同水解時(shí)間下產(chǎn)物分析，得到最佳水解時(shí)間為16h。
　　 采用乙醇分布沉淀法提取水解液中的低聚殼聚糖，并對(duì)所得各組分分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，采用乙醇分布沉淀法，75%乙醇沉淀可去除聚合度9以上的殼聚糖，87.