紅藻糖苷的抗氧化活性及其對(duì)超低溫凍存微藻的保護(hù)作用.pdf

1、本文分別從掌狀紅皮藻和壇紫菜2種紅藻中提取紅藻糖苷和異紅藻糖苷，并通過(guò)液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)（LC-MS）進(jìn)行了定性和定量測(cè)定；研究了紅藻糖苷（floridoside）和異紅藻糖苷（iso-floridoside）對(duì)H2O2引起的氧化應(yīng)激損傷的肝細(xì)胞（人胎肝L-02細(xì)胞株）的保護(hù)作用，探討紅藻糖苷保護(hù)氧化損傷細(xì)胞的內(nèi)在機(jī)制；采用3種冷凍損傷的微藻細(xì)胞（紫球藻、小球藻、顆石藻）作為研究對(duì)象，探討紅藻糖苷作為冷凍保護(hù)劑保護(hù)超低溫凍存微藻的應(yīng)用前景。<

2、br>　　用70％的乙醇溶液進(jìn)行水浴提取，提取液經(jīng)真空濃縮、萃取脫色、陰陽(yáng)離子交換樹(shù)脂純化、冷凍干燥等過(guò)程，最后得到淺黃色紅藻糖苷樣品。LC-MS檢測(cè)后，掌狀紅皮藻提取物（floridoside）和壇紫菜提取物（iso-floridoside）分別得到95%和91%的純度。
　　分別以不同濃度的紅藻糖苷和異紅藻糖苷(10、100、1000μM)對(duì)L-02細(xì)胞預(yù)處理1h，再利用5mmol/L H2O2引起肝細(xì)胞的氧化損傷，檢測(cè)細(xì)胞存

3、活率、細(xì)胞內(nèi)活性氧水平（ROS）、細(xì)胞凋亡率、線粒體膜電位水平，以及超歧化物氧化酶（SOD）和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）活性。結(jié)果表明紅藻糖苷的兩種同分異構(gòu)體floridoside和iso-floridoside都能降低H2O2引起的細(xì)胞死亡，減少活性氧的產(chǎn)生，保護(hù)線粒體膜電位，抑制細(xì)胞晚期凋亡和壞死，增強(qiáng)SOD和GSH-Px活性，且保護(hù)效果呈現(xiàn)劑量依賴性關(guān)系，其中，iso-floridoside的整體活性要優(yōu)于floridos

4、ide的。
　　將紫球藻、小球藻和顆石藻3種不同的微藻置于含10% DMSO和不同濃度紅藻糖苷的凍存液中，凍存并解凍后，以流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞存活率，測(cè)定復(fù)養(yǎng)后藻株的生長(zhǎng)曲線及相關(guān)生理參數(shù)。結(jié)果顯示，由于冷凍損傷，凍存后各種藻細(xì)胞的生長(zhǎng)速率、細(xì)胞密度及生理指標(biāo)都顯著性下降，而紅藻糖苷協(xié)同DMSO能夠顯著增加細(xì)胞的存活率，尤其15%紅藻糖苷能將紫球藻存活率提升20%（P<0.05）；生長(zhǎng)曲線也得到明顯改善；且對(duì)PSII最大光能轉(zhuǎn)化效率