柚皮素混合膠束體系的構(gòu)建及其體內(nèi)外評價.pdf

1、柚皮素(naringenin，NAR)為柚皮苷的苷元，屬于天然黃酮類，主要存在于葡萄柚中。具有廣泛的藥理作用與生理活性，如抗菌、抗炎、抗氧化、止咳祛痰、降血脂、抗癌抗腫瘤、解痙和利膽等。然而，NAR作為黃酮類組分其水溶性較差，進(jìn)而導(dǎo)致其生物利用度不高，使其臨床應(yīng)用受限。本文通過兩種制劑學(xué)手段:高壓均質(zhì)法制備磷脂/十聚甘油單月桂酸酯二元混合膠束(phospholipidspolyglyceryl-10 laurate binary mix

2、ed micelles，BMM)和薄膜水化法制備磷脂/膽鹽/聚維酮K30三元混合納米膠束(phospholipids-bile salt-PVP K30 ternary mixedmicelles，TMM)，并將這兩種膠束體系包載柚皮素得到兩種柚皮素載藥膠束，即柚皮素二元混合納米膠束(NAR-BMM)與柚皮素三元混合納米膠束(NAR-TMM)，以提高柚皮素的溶解度與口服生物利用度，為柚皮素給藥系統(tǒng)的開發(fā)提供理論基礎(chǔ)。全文主要分為以下六個

3、部分:
　　第一章綜述
　　本章對NAR的藥理作用與理化性質(zhì)進(jìn)行簡要的說明，對其現(xiàn)有的各種新劑型，如復(fù)合物包合物、納米粒、固體分散體、自微乳等進(jìn)行總結(jié)與歸納。此外，對膠束的發(fā)展概況進(jìn)行了簡要的闡述，著重介紹了本文所研究的磷脂-十聚甘油單月桂酸酯二元混合膠束與磷脂/膽鹽/聚維酮三元納米膠束。本章就以上幾個方面的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述，為本課題的后續(xù)研究做鋪墊。
　　第二章處方前研究
　　本章建立了高效液相色譜(HPLC)

4、法對NAR-BMM和NAR-TMM中的藥物含量進(jìn)行檢測與定量，并考察了室溫下NAR在不同pH（1.2、4.5和7.4）介質(zhì)和純水中的溶解度，結(jié)果顯示pH7.4時所測得的溶解度最大，但也僅為(41.62±0.36)μg·mL-1，說明NAR是難溶性藥物。
　　第三章柚皮素/磷脂/十聚甘油單月桂酸酯二元混合膠束的制備與體外評價
　　本章采用高壓均質(zhì)法制備磷脂/十聚甘油單月桂酸酯二元混合膠束，并以該技術(shù)制備柚皮素的柚皮素二元混合膠

5、束(NAR-BMM)。以透光率和包封率為主要指標(biāo)，利用單因素實驗初步篩選NAR-BMM的制備處方與工藝，再利用正交實驗優(yōu)化出具有最佳包封率與載藥量的NAR-BMM制備工藝與處方為:投藥量為2 mg·mL-1，輔料總量為30 mg·mL-1，磷脂(PL)與十聚甘油單月桂酸酯(polyglyceryl-10 laurate，PG-10L)的質(zhì)量比是1∶1，攪拌溫度為60℃，均質(zhì)壓力為500 bar，循環(huán)3次。驗證實驗表明該處方工藝下NAR-

6、BMM包封率最高，可達(dá)82.5％，載藥量為5.16％。
　　對NAR-BMM體系的體外性狀進(jìn)行評價，結(jié)果表明，該體系制備的載藥膠束均勻透明、流動性好，其粒徑為（37.73±0.88）nm，多分散系數(shù)為（0.06±0.01），Zeta電位為-（14.8±0.94）mV。體外釋藥實驗顯示:NAR-BMM在三種不同pH介質(zhì)中的釋放速率與72 h的累計釋放量均顯著高于柚皮素原料藥，表明NAR-BMM體系可顯著提高柚皮素的溶解度。但熱穩(wěn)定性

7、實驗顯示:含藥量為4mg·mL-1的NAR-BMM在（55±5）℃條件下，靜置一個月后，其包封率與粒徑均出現(xiàn)顯著的變化，且有絮狀物析出，振搖后可分散均勻，說明高含量的NAR-BMM體系熱穩(wěn)定性較差。
　　第四章柚皮素/磷脂/膽鹽/聚維酮三元納米載藥膠束的制備及體外評價
　　本章采用薄膜水化法制備磷脂/膽鹽/聚維酮三元納米混合膠束，并以此膠束技術(shù)制備NAR三元混合載藥膠束(NAR-TMM)。通過單因素實驗與正交實驗對影響NAR

8、-TMM包封率與載藥量的主要因素進(jìn)行考察，最后得到NAR-TMM的最佳處方為:輔料總投量為1000mg，磷脂與膽酸鈉的質(zhì)量比為4∶3，聚維酮K30(PVP K30)投量為300mg，投藥量為40 mg，水化體積為10 mL。以該工藝制備的NAR-TMM包封率最高可達(dá)87.56％，載藥量為3.37％。
　　通過透射電鏡(TEM)和Brookharen動態(tài)光散射激光粒度分析儀考察NAR-TMM的形態(tài)、粒徑和Zeta電位，結(jié)果顯示:NA

9、R-TMM為均勻分散的球形粒子，其粒徑為(41.5±0.3)nm，Zeta電位為-（24.3±0.64）mV。體外釋藥試驗表明NAR-TMM可以顯著改善NAR的溶解度與釋放速率，4h時NAR-TMM在雙蒸水內(nèi)的累積釋藥率達(dá)到95％以上。此外，通過對該體系進(jìn)行熱穩(wěn)定實驗證明NAR-TMM體系具有良好的熱穩(wěn)定。
　　第五章柚皮素及其制劑的體內(nèi)分析方法的建立
　　本章建立HPLC法測定大鼠血漿和小鼠組織樣品中柚皮素含量的體內(nèi)分析方

10、法，以直接沉蛋白法與酶解法分別測定血漿中游離柚皮素的含量(C)和血漿中柚皮素的總量(C')，以萃取法處理血漿與組織樣品，流動相均為30％的乙腈磷酸鹽緩沖液（以磷酸調(diào)節(jié)pH至1.2），Symmetry C18色譜柱，柱溫為30℃，進(jìn)樣量為20μL，檢測波長為288 nm，對該體內(nèi)分析方法進(jìn)行了方法學(xué)的驗證，結(jié)果表明，該分析方法具有較強(qiáng)的專屬性，回收率、精密度與穩(wěn)定性等指標(biāo)均符合體內(nèi)藥物分析的要求。
　　第六章柚皮素混合膠束體系藥動學(xué)

11、及組織分布研究
　　本章以SD大鼠為動物模型，單次口服90 mg·kg-1的NAR原料藥、NAR-TMM和NAR-BMM，并分別對藥物在血漿中游離柚皮素的濃度(C)與血漿中總柚皮素濃度(C')進(jìn)行檢測，利用藥動學(xué)軟件BAPP2.3計算相關(guān)藥動學(xué)參數(shù)。SD大鼠單次口服給藥后的血漿中游離NAR濃度測定結(jié)果顯示，原料藥、NAR-BMM和NAR-TMM的AUC0-48分別為2745.57、15004.41和18815.45 h·ng·mL

12、-1;而血漿中總NAR濃度測定結(jié)果顯示，原料藥、NAR-BMM和NAR-TMM的AUC'0-48分別為16324.83、139130.23和242982.58 h·ng·mL-1。此時，NAR-BMM和NAR-TMM相對于NAR的生物利用度Fr與F'r分別為546.50％、685.30％與852.26％、1488.42％。說明所制備的兩種制劑均顯著提高了柚皮素的生物利用度，且NAR-TMM較NAR-BMM的增幅更大，這可能與之較好的穩(wěn)定