柚皮素對(duì)淫羊藿苷吸收的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：觀察柚皮素對(duì)淫羊藿苷吸收的影響并探討其機(jī)制。
　　方法：1、雄性SD大鼠36只，隨機(jī)分成3組，淫羊藿苷組（ICA組）、柚皮素50 mg/kg+淫羊藿苷組（Nar50+ICA組）和柚皮素200 mg/kg+淫羊藿苷組（Nar200+ICA組）。淫羊藿苷組給予淫羊藿苷（100 mg/kg）行十二指腸給藥1次，給藥結(jié)束后在1、5、10、20、30、40、50、60、75、90、120、180、240 min（每個(gè)時(shí)間點(diǎn)4只大鼠）取

2、血。柚皮素+淫羊藿苷組先分別給予柚皮素分別予以50 mg/kg和200 mg/kg灌胃，每天二次，連續(xù)7天,末次給藥3小時(shí)后十二指腸給予淫羊藿苷100 mg/kg,按上述時(shí)間點(diǎn)取血。RP HPLC-DAD檢測(cè)其淫羊藿苷的血藥濃度。
　　2、制備完整的Caco-2細(xì)胞模型，模型成功后，給予柚皮素（50、100、200μmol/L）與Caco-2細(xì)胞共孵育24小時(shí)后，將淫羊藿苷（100μmol/L）與Caco-2細(xì)胞共孵育3小時(shí)，分別

3、收集刷狀緣側(cè)、基底側(cè)及細(xì)胞樣本，UPLC-MS/MS法檢刷狀緣側(cè)和基底側(cè)寶藿苷濃度。Real Time PCR法檢測(cè)細(xì)胞中轉(zhuǎn)運(yùn)體基因表達(dá)情況。
　　3、雄性SD大鼠，隨機(jī)分成5組，空白組（Control）、淫羊藿苷組（ICA組）、柚皮素50 mg/kg+淫羊藿苷組（Nar50+ICA組）、柚皮素100 mg/kg+淫羊藿苷組（Nar100+ICA組）和柚皮素200 mg/kg+淫羊藿苷組（Nar200+ICA組）每組5只。淫羊藿苷

4、組給予含淫羊藿苷（0.15μmol/L）的人工腸液行十二指腸至回腸循環(huán)30 min，柚皮素+淫羊藿苷組先給予柚皮素（50、100、200 mg/kg）灌胃，每天二次，連續(xù)7天，末次給藥3 h后給予含淫羊藿苷（0.15μmol/L）的人工腸液行十二指腸至回腸循環(huán)30min?？瞻捉M給予空白人工腸液循環(huán)30 min。循環(huán)結(jié)束后取腸組織和肝門靜脈取血。UPLC-MS/MS法檢測(cè)血漿、腸組織中寶藿苷的濃度。Real Time PCR法檢測(cè)大鼠十二

5、指腸組織轉(zhuǎn)運(yùn)體基因表達(dá)情況。Western Blot法檢測(cè)大鼠十二指腸組織中轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果：1、柚皮素對(duì)淫羊藿苷血藥濃度的影響：與ICA組相比，Nar50+ICA組在10 min以前血藥濃度明顯高于ICA組。20 min后與ICA組無明顯差異。Nar200+ICA組在10 min以前低于ICA組。
　　2、柚皮素對(duì)淫羊藿苷轉(zhuǎn)運(yùn)的影響：在刷狀緣側(cè)，與ICA組相比，Nar100+ICA組、Nar200+ICA組I

6、CS含量明顯高于ICA組，分別為2倍、1.5倍；ADI含量分別增高了約3倍、1.5倍。在基底端側(cè)，與ICA組相比，不同劑量的柚皮素組ICS的含量沒有明顯變化。Real-Time PCR檢測(cè)結(jié)果表明，與空白組比較，Nar50+ICA組Abcg5 mRNA表達(dá)水平增高，均增高了約2倍。Nar50+ICA組、Nar100+ICA組Mdr1a mRNA表達(dá)水平均增高了約2.5倍，Oct3 mRNA表達(dá)無明顯變化。
　　3、柚皮素對(duì)淫羊藿苷

7、吸收的影響：與 ICA組相比，Nar50+ICA組、Nar100+ICA組、Nar200+ICA組在血液中的寶藿苷含量明顯低于ICA組，均降低了約1.4倍。在十二指腸組織中寶藿苷的含量降低了約1.5倍。Real-Time PCR檢測(cè)結(jié)果表明，與空白組比較，Nar50+ICA組、Nar100+ICA組、Nar200+ICA組Abcg5、Mdr1a mRNA表達(dá)水平增高。 Western Blot檢測(cè)結(jié)果表明：與空白組相比，Nar50+IC