淫羊藿苷對COPD模型炎癥反應(yīng)的影響和機制研究.pdf

1、目的：
　　本論文通過體內(nèi)和體外實驗來研究淫羊藿苷對慢性阻塞性肺疾?。–OPD）模型（動物和細(xì)胞模型）的抗炎效果，來探討淫羊藿苷抑制慢性阻塞性肺疾病炎癥的機制。
　　材料與方法：
　　1.體內(nèi)實驗：COPD體內(nèi)炎癥模型是以脂多糖（LPS）氣管滴注加香煙煙霧暴露的方法刺激SD大鼠而建立的。40只SD大鼠隨機分為4組：正常組，COPD模型組，強的松組，淫羊藿苷組。HE染色切片觀察各組大鼠肺組織；流式細(xì)胞術(shù)檢測各組大鼠外周血

2、CD4+，CD8+T細(xì)胞的比例；用微板酶標(biāo)法和分光光度計測定各組大鼠外周血SOD，NO和iNOS的含量；用酶標(biāo)記免疫吸附測定法（ELISA）檢測各組大鼠血清和肺泡灌洗液中的TNF-α和IL-10的水平；用免疫組化檢測肺組織中MMP-9，MMP-2和TIMP-1的表達(dá)情況。
　　2.體外實驗：以LPS刺激大鼠肺泡巨噬細(xì)胞（NR8383）建立細(xì)胞炎癥模型，細(xì)胞分為3組：對照組，LPS組，淫羊藿苷組。采用微板酶標(biāo)法和分光光度計測定各組細(xì)

3、胞培養(yǎng)上清SOD，NO和iNOS含量；用ELISA法檢測各組細(xì)胞培養(yǎng)上清液中細(xì)胞因子TNF-α，IL-10和MMP-9的濃度；采用蛋白質(zhì)印跡法（westemblot）檢測 LPS組和淫羊藿苷組中 MMP-9，MMP-2，TIMP-1，MAPK的蛋白水平，以及p38抑制劑SB203580預(yù)處理后，MMP-9蛋白水平的變化。
　　結(jié)果：
　　1.體內(nèi)實驗：COPD模型組肺組織HE染色光學(xué)顯微鏡下觀察到肺泡壁和肺間隔炎性細(xì)胞浸潤，

4、肺間隔斷裂，融合，肺實質(zhì)破壞，形成廣泛性肺氣腫，強的松組和淫羊藿苷組大鼠 COPD病理改變較模型組明顯減輕，淫羊藿苷組接近于正常組。COPD模型組大鼠外周血淋巴細(xì)胞CD8+T細(xì)胞比例比正常組高，淫羊藿苷組與模型組比較，比例下降（p<0.05）。模型組的CD4+/ CD8+T細(xì)胞比值明顯低于正常對照組（p<0.05），而淫羊藿苷干預(yù)逆轉(zhuǎn)了這種結(jié)果。淫羊藿苷顯著地抑制了由于煙霧暴露/LPS刺激大鼠而產(chǎn)生的TNF-α，NO和iNOS，同時提高

5、了抑炎因子IL-10的水平。與正常組比較，COPD模型組大鼠肺組織中MMP-9和TIMP-1表達(dá)增加（p<0.05），淫羊藿苷組大鼠肺組織中MMP-9和TIMP-1表達(dá)趨向于正常組。
　　2.體外實驗：淫羊藿苷顯著地抑制了由于LPS激活的NR8383細(xì)胞而產(chǎn)生的TNF-α， NO和iNOS，同時提高了抑炎因子IL-10的水平。Western blotting結(jié)果顯示出淫羊藿苷上調(diào)了由于LPS引起的MMP-9，TIMP-1， p-p