淫羊藿苷對AD細(xì)胞模型CREB及BDNF表達(dá)的影響及機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　阿爾茨海默病（Alzheimer'disease，AD），是一種多因素引起的進(jìn)行性致死性神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，臨床表現(xiàn)為認(rèn)知和記憶能力不斷惡化，日常生活能力進(jìn)行性減退，并有各種神經(jīng)精神癥狀和行為障礙。老年斑(SPs)和神經(jīng)元纖維纏結(jié)(NFTs)被認(rèn)為是AD關(guān)鍵的病理特征。目前多數(shù)學(xué)者認(rèn)為β-淀粉樣蛋白(β-amyloid，Aβ)沉積成為AD發(fā)病過程中的重要因素，具有關(guān)鍵作用，是各種原因誘發(fā)AD的共同通路。 Aβ具有神經(jīng)毒

2、性，當(dāng)前應(yīng)用Aβ25-35片段誘導(dǎo)PC12細(xì)胞損傷建立AD細(xì)胞模型已被廣泛用于體外研究實(shí)驗(yàn)。淫羊藿苷(icaritin，ICA)為小檗科淫羊?qū)僦参镆蜣降闹饕钚猿煞?，具多重藥理學(xué)作用，近年來淫羊藿苷在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的藥理作用及其機(jī)制研究日益增多，具有抗癡呆抗衰老、抗抑郁、改善缺血性腦損傷等作用。cAMP反應(yīng)序列結(jié)合蛋白(CREB)是一種重要的核轉(zhuǎn)錄因子，調(diào)節(jié)啟動(dòng)子中具有環(huán)磷酸腺苷反應(yīng)單元(CRE)的基因轉(zhuǎn)錄，在神經(jīng)元再生、突觸形成及學(xué)習(xí)

3、記憶等方面具有重要的調(diào)節(jié)作用。腦源性神經(jīng)生長因子（Brain-derived neurotrophic factor，BDNF）是神經(jīng)營養(yǎng)因子(NT)家族的重要成員，對外周和中樞神經(jīng)具有保護(hù)作用，不但能促進(jìn)神經(jīng)元生存、生長、分化，而且在調(diào)節(jié)突觸傳遞和突觸可塑性方面發(fā)揮重要作用。體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，給予神經(jīng)元亞毒性劑量的Aβ1-42，CREB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路受阻，BDNF含量下降，進(jìn)一步導(dǎo)致突觸功能障礙和神經(jīng)元變性。本研究以Aβ25-35誘導(dǎo)損傷P

4、C12細(xì)胞為AD細(xì)胞模型，探討ICA對其CREB及BDNF表達(dá)的影響。
　　方法:
　　1、細(xì)胞培養(yǎng):PC12細(xì)胞培養(yǎng)于含10％胎牛血清和含100U/ml青霉素及100U/ml鏈霉素的高糖DMEM培養(yǎng)基中，置于37℃、含5％CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，2天換液一次，藥物干預(yù)及各項(xiàng)指標(biāo)檢測均取對數(shù)生長期的細(xì)胞。
　　2、MTT比色法:實(shí)驗(yàn)分control組、Aβ組、ICA組、LY組、LY+ICA組。除control組外，余下四

5、組Aβ的濃度均為20μmol/L; ICA組:先加ICA孵育1小時(shí)后再加Aβ，ICA濃度為20μmol/L; LY組的LY294002濃度為50μmol/L; LY+ICA組為先加LY294002濃度為50μmol/L孵育1h，再加ICA和Aβ使其濃度為20μmol/L。
　　3、Western blot檢測:實(shí)驗(yàn)分組同(2)，測定各組p-CREB(Ser133)/CREB、BDNF、p-Akt(Ser473)/Akt的蛋白表達(dá)。

6、
　　結(jié)果:
　　1、與control組比較，Aβ25-35處理使PC12細(xì)胞存活率明顯降低，差異有顯著性（P＜0.01）;與Aβ組比較，ICA預(yù)處理能提高PC12細(xì)胞存活率，差異有顯著性(P＜0.01);與ICA組比較，ICA+LY組PC12細(xì)胞存活率下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);
　　2、與Control組比較，Aβ25-35處理使PC12細(xì)胞中P-CREB、BDNF、P-Akt蛋白表達(dá)下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)

7、意義(P＜0.05);與Aβ組相比，ICA組能夠明顯增加模型細(xì)胞中P-CREB、BDNF、P-Akt蛋白的表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);與ICA組相比，ICA+LY組P-CREB、BDNF、P-Akt蛋白的表達(dá)下調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);
　　結(jié)論:
　　1.經(jīng)Aβ25-35誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞存活率明顯下降。ICA可明顯改善Aβ25-35誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞存活率。
　　2.經(jīng)PI3K/Akt信號(hào)通

8、路抑制劑LY294002作用后，ICA提高PC12細(xì)胞存活率的作用被明顯抑制。提示ICA可能通過PI3K/Akt信號(hào)通路發(fā)揮保護(hù)作用。
　　3.Aβ25-35能明顯下調(diào)PC12細(xì)胞中P-CREB、BDNF、P-Akt蛋白表達(dá)水平，而ICA干預(yù)后能上調(diào)上述蛋白的表達(dá)，發(fā)揮保護(hù)作用。
　　4.經(jīng)PI3K/Akt信號(hào)通路抑制劑LY294002作用后，ICA上調(diào)上述蛋白表達(dá)的作用被抑制，提示ICA可能通過PI3K/Akt信號(hào)通路，上