鹽酸多奈哌齊對AD模型大鼠海馬BDNF表達的影響.pdf

1、鹽酸多奈哌齊(Donepezil Hydrochloride，DN)作為一種乙酰膽堿酯酶抑制劑廣泛用于阿爾茨海默病(Alzheimer's disease，AD)的治療，近幾年的研究發(fā)現(xiàn)其對AD時神經(jīng)元還有保護作用，使神經(jīng)元免于丟失。但其具體的作用機制仍不明確，特別是有關(guān)其能否通過影響AD患者腦內(nèi)腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(brain-derivedneurotrophic factor，BDNF)的表達而發(fā)揮神經(jīng)保護作用的研究還較少，故此實驗

2、通過大鼠側(cè)腦室微量注射β-淀粉樣蛋白(β-amyloid protein，Ap25-35)建立AD動物模型，后予以DN干預(yù)，通過免疫組化及免疫印跡方法觀察大鼠海馬區(qū)BDNF的表達變化，觀察DN對AD模型大鼠海馬BDNF表達的影響，并探討DN對AD時神經(jīng)元保護作用的機制。 材料與方法： 1、實驗動物及分組：選用中國醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供的Wistar♂大鼠48只(中國醫(yī)科大學(xué)實驗動物部，許可證號：SYXK[遼]2003-

3、0013)，3月齡，體重200±20克，隨機分為對照組、模型組、干預(yù)組3組。 2、模型組、干預(yù)組通過側(cè)腦室注射Aβ25-3515μg建立AD動物模型，對照組手術(shù)中給予等量的生理鹽水；干預(yù)組手術(shù)后給予DN1.5mg·kg-1·d-1，模型組及對照組手術(shù)后給予等量的生理鹽水；持續(xù)四周。 3、Morris水迷宮行為學(xué)測試各組大鼠的近期學(xué)習(xí)記憶能力、鈴木鍍銀染色法及剛果紅染色法觀察大鼠腦內(nèi)的病理變化以判定模型是否成功。

4、4、用免疫組織化學(xué)染色法觀察各組大鼠海馬BDNF陽性細胞的表達情況。 5、用免疫印跡方法分析各組大鼠海馬BDNF的表達水平。 6、所得數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差(-x±s)表示，結(jié)合圖像采集分析系統(tǒng)，應(yīng)用SPSS11.5統(tǒng)計軟件，用單因素方差分析進行組間比較，p<0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義，p<0.01為有顯著統(tǒng)計學(xué)意義。 實驗結(jié)果 1、Morris水迷宮測試結(jié)果提示隨著實驗的進行，模型組大鼠的平均潛伏期較對照組明顯

5、延長(p<0.05)。 2、剛果紅染色顯示模型組及干預(yù)組大鼠皮層及海馬細胞外可見散在的老年斑，而對照組未見此病理改變。 3、鈴木鍍銀染色顯示模型組及干預(yù)組大鼠皮層及海馬神經(jīng)元內(nèi)神經(jīng)原纖維排列紊亂、扭曲和聚集，可見明顯的神經(jīng)原纖維纏結(jié)(Neurofibrillary tangles，NFTs)，而對照組未見此病理改變。 4、免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示鏡下BDNF免疫反應(yīng)產(chǎn)物為棕黃色，主要表達于神經(jīng)元的細胞膜、胞體及突起。

6、本文重點觀察有代表性的海馬CA1、CA3和DG區(qū)。對照組大鼠海馬可見較多的陽性神經(jīng)元；模型組陽性反應(yīng)產(chǎn)物著色較對照組均較淺，積分光密度值(IOD)均較對照組降低(p<0.05)；而干預(yù)組CA1、DG區(qū)BDNF陽性反應(yīng)產(chǎn)物的IOD較模型組為多(p<0.05)。 5、免疫印跡結(jié)果顯示模型組大鼠海馬的BDNF表達較對照組下降，(p<0.01)，干預(yù)組表達較模型組增加(p<0.05)。 結(jié)論： 1、側(cè)腦室注射Aβ25-3