甲狀腺素聯(lián)合多奈哌齊對成年期甲減大鼠海馬內(nèi)超微結(jié)構(gòu)及synaptotagmin-1表達的影響.pdf

1、目的：
　　成年期甲狀腺功能減退癥（簡稱甲減）會引起海馬形態(tài)和神經(jīng)認知缺陷，涉及到海馬內(nèi)超微結(jié)構(gòu)和突觸相關(guān)蛋白，傳統(tǒng)的甲狀腺素（T4）替代療法可能不能使損傷完全恢復。本研究旨在觀察甲狀腺素聯(lián)合多奈哌齊(DON)對成年期甲減大鼠海馬內(nèi)超微結(jié)構(gòu)及synaptotagmin-1（syt-1）表達的影響。
　　方法：
　　健康3月齡成年雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠60只，清潔級，適應性喂養(yǎng)一周后，所有實驗大鼠隨

2、機分為5組：正常對照組、甲減組、甲狀腺素治療組、多奈哌齊治療組、甲狀腺素聯(lián)合多奈哌齊治療組。除對照組僅飲用正常水之外，其余4組大鼠飲用水中加入濃度0.05％丙基硫氧嘧啶(PTU)構(gòu)建成年期甲減模型共6周，從第5周起，在上述方法繼續(xù)造模的前提下，多奈哌齊治療組在飲水中加入濃度為0.005%DON，甲狀腺素治療組予腹腔注射T4（濃度為6μg/100 g體重），甲狀腺素聯(lián)合多奈哌齊治療組同時給予T4+DON治療，余下三組每日予相同劑量的氯化鈉

3、生理鹽水腹腔注射。每周一次稱量大鼠體重并記錄，造模結(jié)束后分別取材，應用放射免疫發(fā)光法檢測各組大鼠血清甲狀腺激素水平，在JEM-1230型透射電鏡下觀察海馬內(nèi)超微結(jié)構(gòu)并攝片，分別用免疫印跡方法（Western Blot）和實時定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應（real-time qPCR）分析各組大鼠海馬內(nèi)syt-1在蛋白水平和mRNA水平上的表達。
　　結(jié)果：
　　1、各組大鼠體重值：成功造模后，相比造模前對照組體重增加了92.9%，

4、而甲減組、單獨甲狀腺素治療組、單獨多奈哌齊治療組、兩者聯(lián)合治療組與造模前相比體重分別增加39.0%、62.8%、36.1%、64.2%，與對照組體重增加值相比均有統(tǒng)計學差異（P＜0.01）。
　　2、各組大鼠血清甲狀腺激素水平：甲減組、多奈哌齊治療組大鼠血清甲狀腺激素水平明顯降低（P＜0.01），甲狀腺素治療組、聯(lián)合治療組與對照組相比差異無統(tǒng)計學意義。
　　3、各組大鼠海馬內(nèi)超微結(jié)構(gòu)：透射電鏡下甲減組大鼠海馬內(nèi)神經(jīng)元出現(xiàn)明顯

5、的病理學改變，其中線粒體呈現(xiàn)腫脹、嵴斷裂、空泡變性，游離高爾基體、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、核糖體稀疏，核膜內(nèi)側(cè)周圍沉積高電子密度異常團塊，突觸前后膜結(jié)構(gòu)界限不清晰，釋放突觸小泡數(shù)量減少，甲狀腺素或多奈哌齊治療組上述損傷有所改善，而甲狀腺素聯(lián)合多奈哌齊治療組恢復后的超微結(jié)構(gòu)最接近于對照組。
　　4、各組大鼠海馬內(nèi)syt-1蛋白的表達：在蛋白和mRNA水平，甲減組背側(cè)海馬內(nèi)syt-1表達量明顯降低（P＜0.01），單獨T4治療后syt-1表達仍未