甲狀腺素聯(lián)合多奈哌齊對(duì)成年期甲減大鼠海馬、前額葉突觸可塑性的影響.pdf

1、目的：成年期甲狀腺功能減退癥（甲減）是一種常見(jiàn)的內(nèi)分泌疾病，可引起認(rèn)知功能損傷，其神經(jīng)機(jī)制可能涉及神經(jīng)元突觸可塑性。目前一些研究表明使用常規(guī)劑量的T4替代治療至血清甲狀腺激素水平正常時(shí)，甲減導(dǎo)致的腦損傷并不能完全恢復(fù)。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立成年期甲減動(dòng)物模型，觀察單獨(dú)甲狀腺素（Thyroxine, T4）替代治療以及T4聯(lián)合多奈哌齊(Donepezil, DON)治療對(duì)成年期甲減大鼠海馬以及前額葉突觸可塑性相關(guān)指標(biāo)的影響。
　　方法：

2、r>　　健康成年期雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠60只，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后隨機(jī)分成五組，即對(duì)照組、甲減組、多奈哌齊治療組、甲狀腺素治療組以及甲狀腺素聯(lián)合多奈哌齊治療組。通過(guò)抗甲狀腺治療藥物丙基硫氧嘧啶（Propylthiouracil, PTU）加入大鼠飲水中（配成濃度0.05%）建立甲減大鼠模型，周期六周。自第五周起，多奈哌齊治療組、甲狀腺素治療組和聯(lián)合治療組SD大鼠在引用PTU水的情況下，多奈哌齊治療組SD大鼠同時(shí)在飲水

3、中加入多奈哌齊(0.005%（w/v）)，甲狀腺素治療組同時(shí)每日進(jìn)行腹腔注射甲狀腺素（6μg/100g體重），聯(lián)合治療組大鼠同時(shí)予甲狀腺素腹腔注射并在飲水中加入多奈哌齊，對(duì)照組SD大鼠腹腔注射等劑量的生理鹽水。造模結(jié)束后，腹主動(dòng)脈采血，冰上取腦，分離海馬和前額葉組織。采用放射免疫法評(píng)估各組大鼠甲狀腺功能狀態(tài)。采用比色法測(cè)定大鼠海馬組織內(nèi)乙酰膽堿（acetylcholine, ACh）含量和乙酰膽堿酯酶（acetylcholinester

4、ase, AChE）活性。免疫組織化學(xué)方法觀察大鼠海馬各區(qū)各層內(nèi)突觸結(jié)合蛋白-1（Synaptotagmin-1, Syt-1）和突觸小體相關(guān)蛋白 SNAP-25（Synaptosome-associated protein of25 kD）的表達(dá)與分布。透射電鏡觀察前額葉內(nèi)神經(jīng)元、突觸、髓鞘超微結(jié)構(gòu)，比色法測(cè)定前額葉內(nèi)ACh含量。
　　結(jié)果：
　?。?）體重：造模前，五組大鼠體重水平差異無(wú)顯著性意義（P>0.05）；造模結(jié)

5、束后，對(duì)照組、甲減組、多奈哌齊治療組、甲狀腺素治療組及聯(lián)合治療組五組大鼠體重較造模前各增加了49.29%、21.28%、19.53%、31.90%及32.44%。而造模后各組SD大鼠體重顯著低于造模后對(duì)照組（P<0.05）。
　　（2）甲狀腺功能狀態(tài)：甲減及多奈哌齊治療組SD大鼠血清T3、T4水平明顯低于對(duì)照組，TSH水平明顯高于對(duì)照組（P<0.01）；甲狀腺素治療組和聯(lián)合治療組大鼠血清T3、T4及TSH水平與對(duì)照組相比，差異無(wú)顯

6、著性意義（P>0.05）。
　　(3)海馬內(nèi)ACh含量：甲減組ACh含量與對(duì)照組相比降低（26.98%）（P=0.027）；經(jīng)過(guò)甲狀腺素、多奈哌齊及聯(lián)合治療后，各組內(nèi)ACh含量與對(duì)照組相比無(wú)明顯差異(P值分別為0.212，0.860和0.255)；與甲減組相比，多奈哌齊治療組ACh含量升高16.58%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.321）；甲狀腺素治療組及聯(lián)合治療組ACh含量與甲減組相比分別增加34.07%和54.92%，差異有統(tǒng)計(jì)

7、學(xué)意義（P=0.046, P=0.002）。
　　(4)海馬內(nèi)AChE活性：與對(duì)照組比較，甲減組、多奈哌齊治療組及聯(lián)合治療組大鼠海馬中AChE活性分別減少了34.35，40.13和39.12%，差異有顯著意義(P值分別為0.028，0.014和0.016)；甲狀腺素治療組AChE活性與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　(5)海馬各亞區(qū)亞層內(nèi)Syt-1蛋白表達(dá)：甲減組及多奈哌齊治療組Syt-1免疫反應(yīng)產(chǎn)物OD值

8、在海馬CA1-SO、CA1-SR、CA3-SL、CA3-SR及DG-ML層表達(dá)明顯低于對(duì)照組（P<0.01）。T4替代治療組Syt-1的免疫反應(yīng)產(chǎn)物OD值在以上各層仍低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。聯(lián)合治療組海馬以上各層OD值與對(duì)照組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。與甲減組相比，多奈哌齊治療組以上各層Syt-1免疫反應(yīng)產(chǎn)物 OD絕對(duì)值高于甲減組，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；T4替代治療組Syt-1免疫反應(yīng)產(chǎn)

9、物OD值在海馬CA1-SO，CA1-SR，CA3-SL，CA3-SR層均明顯高于甲減組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；聯(lián)合治療組海馬 CA1-SO，CA1-SR，CA3-SL，CA3-SR以及DG-ML層均明顯高于甲減組對(duì)應(yīng)層，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。聯(lián)合治療組以上各層 OD值與 T4治療組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　(6)海馬各亞區(qū)亞層內(nèi)SNAP-25蛋白表達(dá)：甲減組及多奈哌齊治療組SNAP-25

10、免疫反應(yīng)產(chǎn)物OD值在海馬CA3-SO, CA3-SR及CA1、DG各層表達(dá)明顯高于對(duì)照組（P<0.01）。T4替代治療組中SNAP-25的OD值在CA1所有層和CA3-SO層仍明顯高于對(duì)照組(P<0.01)。與對(duì)照組比較，聯(lián)合治療組 SNAP-25陽(yáng)性顆粒產(chǎn)物 OD值差異無(wú)顯著意義（P>0.05）。與甲減組相比，多奈哌齊治療組以上各層SNAP-25免疫反應(yīng)產(chǎn)物OD絕對(duì)值低于甲減組，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；T4替代治療組SNA

11、P-25免疫反應(yīng)產(chǎn)物OD值在海馬CA3-SR以及DG-ML，DG-PL層均低于甲減組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；聯(lián)合治療組海馬 CA1-SO，CA1-SR，CA1-SLM，CA3-SO，CA3-SR以及DG-ML，DG-PL層均明顯低于甲減組對(duì)應(yīng)層，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。聯(lián)合治療組以上各層 OD值與 T4治療組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　(7)前額葉超微結(jié)構(gòu)：甲減組大鼠前額葉內(nèi)神經(jīng)元、突觸及髓

12、鞘出現(xiàn)明顯的退行性改變，甲減組大鼠神經(jīng)元染色質(zhì)邊集、核濃縮，胞漿明顯減少，其內(nèi)游離核糖體、溶酶體等細(xì)胞器明顯減少，線粒體表現(xiàn)為腫脹，斷裂，嵴變短退化，明顯空泡變性，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)明顯擴(kuò)張。突觸前后膜融合，突觸小泡數(shù)量明顯減少，幾乎不見(jiàn)清亮型突觸囊泡，突觸前膜中部分線粒體呈小空泡狀。髓鞘結(jié)構(gòu)明顯變化，表現(xiàn)出明顯的分層損傷，厚度變薄，輪廓變得不規(guī)則。電鏡下觀察到，甲狀腺素以及多奈哌齊治療后，上述神經(jīng)元、突觸及髓鞘超微結(jié)構(gòu)改變有所改善，仍表現(xiàn)出輕微的

13、結(jié)構(gòu)破壞，而聯(lián)合治療組神經(jīng)元、突觸及髓鞘的超微結(jié)構(gòu)形態(tài)與對(duì)照組基本相似。
　　(8)前額葉內(nèi)ACh含量：甲減組ACh水平與對(duì)照組相比降低（29.83%）（P=0.030）；經(jīng)過(guò)甲狀腺素、多奈哌齊及聯(lián)合治療后，各組內(nèi) ACh含量與對(duì)照組相比無(wú)顯著差異(P值分別為0.237,0.291和0.524)；與甲減組相比，多奈哌齊治療組、甲狀腺素治療組及聯(lián)合治療組ACh含量分別增加20.98%，22.26%和30.95%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

14、值分別為0.274,0.946和0.581）。
　　結(jié)論：
　　1.成年期甲減可致SD大鼠海馬及前額葉內(nèi)ACh含量下降，海馬內(nèi)AChE活性降低，T4替代治療2周ACh含量及AChE活性均恢復(fù)至對(duì)照組水平。
　　2.成年期甲減可致SD大鼠前額葉內(nèi)神經(jīng)元、突觸以及髓鞘的超微結(jié)構(gòu)發(fā)生明顯的改變，T4替代治療2周以上改變是可逆的，T4聯(lián)合多奈哌齊治療組恢復(fù)更接近對(duì)照組水平。
　　3.成年期甲減致海馬內(nèi)突觸蛋白Syt-1水