淫羊藿苷對AD細(xì)胞模型GSK-3β表達(dá)影響及機(jī)制研究.pdf

1、背景和目的:
　　阿爾茨海默?。ˋlzheimer's disease，AD）是老年人常見的一種慢性進(jìn)行性神經(jīng)退行性疾病。AD的主要病理學(xué)特征是腦內(nèi)生成有神經(jīng)毒性的β-樣淀粉樣蛋白(β-amyloid，Aβ)，Aβ通過一系列的復(fù)雜分子病理機(jī)制導(dǎo)致大腦神經(jīng)元細(xì)胞變性、缺失，最終導(dǎo)致認(rèn)知功能損害，即腦內(nèi)異常沉積的Aβ是造成AD記憶認(rèn)知損傷的始動(dòng)因素，是誘發(fā)AD的中心環(huán)節(jié)。糖原合成酶激酶3β(Glycogen sunthasekinas

2、e-3β，GSK-3β)是普遍存在于真核細(xì)胞中的一種多功能絲氨酸/蘇氨酸激酶，是糖原合成的關(guān)鍵調(diào)節(jié)酶，是為數(shù)不多的通過磷酸化而失活的蛋白激酶。GSK-3β參與機(jī)體多個(gè)細(xì)胞信號傳導(dǎo)通路，是PI3K/Akt信號通路下游分子，其中GSK-3β過度激活時(shí)促進(jìn)淀粉樣前體蛋白降解產(chǎn)生Aβ，促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞骨架蛋白tau蛋白的異常過度磷酸化，加重神經(jīng)元的退行性變，干擾正常的突觸可塑性，進(jìn)而加速阿爾茨海默病樣病理過程。研究GSK-3β的調(diào)節(jié)機(jī)制對于治療AD

3、至關(guān)重要，抑制GSK-3β活性的過度升高，已成為AD治療藥物的新靶點(diǎn)。
　　淫羊藿苷（icariin，ICA）是小檗科淫羊藿屬植物中的一種黃酮類化合物，近年來，關(guān)于淫羊藿苷在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的藥理作用及其機(jī)制的研究日益增多，研究發(fā)現(xiàn)淫羊藿苷具有抗癡呆抗衰老、抗抑郁、改善缺血性腦損傷等作用。本研究基于PI3K/Akt信號通路，探討ICA對AD細(xì)胞模型存活率及GSK-3β表達(dá)的影響，揭示出AD的部分發(fā)病機(jī)制以及ICA的作用機(jī)制，為指導(dǎo)臨床

4、應(yīng)用和開發(fā)新藥提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:
　　以Aβ25-35孵育PC12細(xì)胞制備的AD細(xì)胞模型為對象，分為5組，分別為正常對照組、Aβ組、Aβ+ICA組、Aβ+LY組、Aβ+LY+ICA組（LY為PI3K/Akt信號通路的經(jīng)典抑制劑），MTT法檢測各組細(xì)胞的存活率，Western-Blot法檢測各組的Akt、p-Akt、GSK-3β、p-GSK-3β的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　(1) MTT法檢測顯示，與正

5、常對照組比較，Aβ孵育后PC12細(xì)胞模型組的存活率明顯下降，差異有顯著性(P＜0.01);與Aβ組相比，加入ICA干預(yù)后細(xì)胞存活率明顯增加，差異有顯著性(P＜0.01);與ICA組相比，ICA+LY組細(xì)胞存活率明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　(2) Western-Blot法檢測顯示，與正常對照組相比，Aβ組的p-Akt水平、p-GSK-3β水平明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。與Aβ組相比，ICA組的

6、p-Akt水平、p-GSK-3β水平明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。與ICA組相比，ICA+LY組p-Akt水平、p-GSK-3β水平明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　(1)經(jīng)Aβ25-35誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞其細(xì)胞存活率明顯下降，ICA可明顯提高Aβ25-35誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞存活率。
　　(2)經(jīng)PI3K/Akt信號通路抑制劑LY294002作用后，ICA提高PC12細(xì)胞存活率